Rekombinanttiproteiinien laadunvalvonta ja sovellukset

Rekombinanttiproteiinien laadunvalvonta on ratkaisevan tärkeää koetietojen luotettavuuden ja toistettavuuden kannalta. Jokainen vaihe projektin suunnittelusta tuotantoprosessiin vaatii tiukkoja laadunvalvontastrategioita.

Laadunvalvontastrategiat

Teollisuussektori noudattaa tiukkoja vakiotoimintamenettelyjä, kun taas akateemisen yhteisön on lisättävä ammatillista tietämystä tietojen toistettavuuden parantamiseksi. Proteiinit, joilla on erityisiä biologisia sovelluksia tai biokemiallisia ominaisuuksia, vaativat räätälöityjä laadunvalvontastrategioita (QC).

Haastavat esimerkit ja ratkaisut

Yaohai Bio-Pharmalla on laaja kokemus yhdistelmä-DNA-tekniikan proteiinien tuotannosta ja puhdistuksesta yhdessä asiantuntijaryhmän kanssa, joka varmistaa, että proteiinituotannon lopputulos on erittäin puhdas. Hyödyntämällä kokemustamme sadoista projekteista, Yaohai tekee ystävällisesti yhteenvedon siitä, kuinka proteiinien puhdistusta voidaan optimoida.

Nukleiinihappoa sitovat proteiinit: Nukleiinihapon poistovaiheet, kuten nukleaasit tai PEI-saostus, ovat välttämättömiä. A260nm/A280nm-suhdetta tarkkaillaan nukleiinihappokontaminaation havaitsemiseksi.

Hiiren Ferritin Heavy Chain 1 kryo-EM:lle: Puhdistusvaiheet on optimoitava ja nukleaaseja on lisättävä A260nm/A280nm-suhteen pienentämiseksi ja proteiinin puhtauden varmistamiseksi.

Ihmisen kimeerinen proteiini dsRBEC: Solujen lyysissä käytetään puskuria, joka sisältää ureaa, mitä seuraa kolonnissa tapahtuva uudelleenlaskostus toiminnallisesti aktiivisten proteiinien saamiseksi.

Kaksiarvoisia kationeja sitovia proteiineja: Spesifisiä kaksiarvoisia kationeja on lisättävä ilmentämisen ja puhdistuksen aikana, ja kelatoivia aineita tulee välttää.

Rauta-rikkiproteiinit: Imidatsolia tulee välttää, jotta estetään [2Fe ± 2S] -klusterin häiriintyminen ja varmistetaan oikea proteiinin laskostuminen ja toiminta.

LLT1:n liukoinen fragmentti: Mutanttisuunnittelu optimoi disulfidisidoksen muodostumisen ja proteiinien laskostumisen, mikä johtaa stabiileihin ja korkeatuottoisiin proteiineihin.

CLK1-kinaasikiteytys: Koekspressio λ-fosfataasin kanssa poistaa fosfaatteja fosforylaatiokohdista, ja kokoekskluusiokromatografiaa (SEC) ja anioninvaihtokromatografiaa käytetään homogeenisen CLK1:n saamiseksi ilman heterogeenista fosforylaatiota.

Proteiinit antigeenien käyttöön: Puhtausarviointi on tarpeen erittäin immunogeenisten proteiinien aiheuttaman kontaminoitumisen välttämiseksi. Rakenteellisten epitooppivasta-aineiden osalta antigeenin kolmiulotteinen konformaatio on säilytettävä.

Aggregaatioalttiit proteiinit: Strategioita, kuten erilaisten kantojen seulonta ja viljelylämpötilojen alentaminen, käytetään aggregaatioongelmien rajoittamiseen, ja nopeita puhdistusstrategioita suunnitellaan.

Endotoksiinin poisto: Menetelmät, kuten positiivinen varauskromatografia ja polykationiligandi-affiniteettikromatografia, poistavat endotoksiinit varmistaen, että LPS-tasot ovat käyttörajojen alapuolella.

Proteiinikompleksit: Alayksiköt ekspressoidaan erikseen ja kootaan in vitro tai yhdessä ekspressoidaan funktionaalisten kompleksien muodostamiseksi. Kompleksin eheys arvioidaan homogeenisuuden ja moolimassan perusteella.

Yhteenveto

Proteiinin tuotanto alkaa strategisella suunnittelulla, jossa otetaan huomioon biokemialliset ominaisuudet ja sovellukset. Ekspression, puhdistuksen ja laadunvarmistuksen aikana olosuhteet ja menetelmät optimoidaan stabiilisuutta, aggregoitumattomuutta ja luontaista tilaa varten. Puhdistetut proteiinit palvelevat erilaisia ​​myöhempiä käyttöjä, kuten biofysikaalista karakterisointia.

Yaohai Bio-Pharma etsii myös aktiivisesti institutionaalisia tai yksittäisiä globaaleja kumppaneita ja tarjoaa alan kilpailukykyisimmän palkkion. Jos sinulla on kysyttävää, ota rohkeasti yhteyttä: [email protected]