Laadunvalvonta ja sovellukset rekombinanttien proteiinien käytössä

Laadunvalvonta rekombinantiproteineille on ratkaisevan tärkeää kokeellisten tietojen luotettavuuden ja toistettavuuden kannalta. Jokainen vaihe, alkaen hankkeen suunnittelusta tuotantoprosessin päättymiseen, vaatii tiukkoja laadunvalvontastrategioita.

Laadunvalvontastrategiat

Teollisuussektori noudattaa ankaria standardisoituja toimintamenetelmiä, kun taas akateeminen yhteisö tarvitsee vahvistaa ammattitaitoa parantaakseen datan toistettavuutta. Proteiinit, joilla on spesifisiä biologisia sovelluksia tai biochemiallisia ominaisuuksia, edellyttävät mukautettuja laadunvalvontastrategioita (QC).

Haastavia esimerkkejä ja ratkaisuja

Yaohai Bio-Pharmailla on laaja kokemus rekombinantiproteiinien tuotannossa ja puhdistamisessa sekä eksperttiprofiilin joukkue, joka varmistaa, että proteiiniennytteidenne valmistetaan korkealla puhtaudella. Satojen projektien perusteella Yaohai yhteenvetoaa, miten proteiinipuhdistusta voidaan optimoida.

Rintama-aineksen sitova proteiini: Nukleinien poistovaiheet, kuten nuklease tai PEI-sedimentointi, ovat välttämättömiä. A260nm/A280nm-suhteeseen valvotaan nukleinsäkeiden saastumista.

Hiirin ferritiinin raskas ketju 1 cryo-EM:lle: Puhdistusvaiheet on optimoitava, ja nukleaseja on lisättävä vähentääkseen A260nm/A280nm-suhteen ja varmistaakseen proteiinin puhtauden.

Hybridi-proteiini inhimillinen dsRBEC: Solujen hajoaminen käyttää urea sisältävää perustetta, jota seuraa sarakkeella tapahtuva uudelleenrakennus saadakseen toiminnallisesti aktiivisia proteiineja.

Divalenttikationeihin sidoutuvat proteiinit: Tiettyjä divalenttikationeita on lisättävä ilmaisun ja puhdistuksen aikana, ja kyverointiaineita tulisi välttää.

Rauta-sulkaproteiinit: Imidatsolia tulisi välttää estääkseen [2Fe ± 2S]-klusterin häiriön, mikä varmistaa oikean proteiinin kääntymisen ja funktion.

LLT1:n ratkova fragmentti: Mutantti suunnittelu optimoi disulfidiparien muodostumisen ja proteiinin kääntymisen, mikä johtaa vakaisiin ja korkeankokaisiin proteiineihin.

CLK1-kiinasen kristallointi: Yhteisilmoitus λ-fosfaataseella poistaa fosfaattit fosforyloimista kohteista, ja kokonaiskokoeristyskromatografia (SEC) sekä anionienvaihtokromatografia käytetään homogeenisen CLK1:n saamiseksi ilman heterogeenistä fosforylausta.

Proteiinit antigenikäyttöön: Puhdasuuden arvio on välttämätöntä varmistaakseen, että ei ole saastuttamista erittäin immunogeenisillä proteiineilla. Rakenneepito-antikeinoille on pidettävä yllä antigenin kolmiulotteinen muoto.

Aggregaatioon alttiit proteiinit: Strategioita, kuten erilaisten pohjien testaus ja kasvatuslämpötilan alentaminen, käytetään rajoittaakseen aggregaatiiongelmia, ja nopeita purificaatiomenetelmiä suunnitellaan.

Endotoxien poisto: Menetelmiä, kuten positiivisen varsin kromatografia ja polycation-liitosaineen affiniteetskromatografia, käytetään endotoxioiden poistamiseen varmistamaan, että LPS-tasot ovat sovellusten rajojen alle.

Proteiinikompleksit: Osayksiköt ilmaistaan erikseen ja montataan in vitro tai ilmaistaan yhdessä muodostaakseen toiminnallisia kompleksia. Kompleksin kokonaisuus arvioidaan homogeenisuuden ja molimassan perusteella.

Johtopäätös

Proteiiniproduktion alku on strateginen suunnittelu, jossa otetaan huomioon biokeemiset ominaisuudet ja sovellukset. Ilmaisun, puhdistuksen ja QC:n aikana optimoidaan ehdoja ja menetelmiä vakauden, ei-kytistyvyyden ja luonnollisen tilan varmistamiseksi. Puhdistetut proteiinit palvelevat monipuolisissa jatkotoiminnoissa, kuten biofyysikaalisessa karakterisoinnissa.

Yaohai Bio-Pharma etsii myös aktiivisesti maailmanlaajuja instituutionaalisia tai yksilöllisiä kumppaneita ja tarjoaa kilpailukykyimpien palkkioita teollisuudessa. Jos sinulla on kysymyksiä, ota meihin iloisin yhteyttä: [email protected]