Rekombinantin ihmisinsuliinin puhdistusprosessin optimointi

Viime vuosina diabetespotilaiden kasvu on johtanut insuliinin kysyntään, mutta edullisesta insuliinista on pulaa. Tehokas ja taloudellinen insuliinin tuotanto on ratkaisevan tärkeää. Pääasiassa Escherichia colin (E. coli) ja hiivan kautta tuotettu E. coli on nopean kasvun ja alhaisten kustannusten vuoksi monimutkainen jatkokäsittely.

Yleiskatsaus jatkokäsittelyyn:

Rekombinantin ihmisinsuliinin puhdistaminen E. coli -inkluusiokappaleista sisältää useita vaiheita, mukaan lukien talteenoton, pesun, liukoiseksi tekemisen ja hapetuksen, pilkkomisen, puskurinvaihdon, kromatografisen puhdistuksen, saostuksen, renaturoinnin, entsymaattisen pilkkomisen ja formuloinnin.

Yaohai Bio-Pharmalla on laaja kokemus yhdistelmä-insuliinin tuotannosta ja puhdistuksesta yhdistettynä asiantuntijatiimiin, jotka varmistavat, että insuliinituotantosi saatetaan loppuun korkealla tehokkuudella. Hyödyntämällä kokemustamme sadoista projekteista, Yaohai tekee ystävällisesti yhteenvedon siitä, kuinka rekombinantin ihmisinsuliinin loppupään puhdistusprosessi voidaan optimoida.

Inkluusiovartalon palautus ja pesu:

Solut hajotetaan käyttämällä mekaanisia menetelmiä (kuten ultraäänikäsittely, korkeapainehomogenointi) tai lysotsyymikäsittelyä, mitä seuraa pesupuskurit (sisältävät ureaa, Triton X-100:aa jne.) epäpuhtauksien poistamiseksi. Pesun aikana parametrit on optimoitava, jotta varmistetaan proteiinin laatu ja samalla hallitaan kustannuksia.

Inkluusiokehon liukeneminen ja hapettuminen:

Inkluusiokappaleiden liuottamiseen käytetään suuripitoisuuksia denaturoivia aineita (kuten guanidiinihydrokloridia ja ureaa), joihin lisätään ditiotreitolia tai β-merkaptoetanolia estämään väärien disulfidisidosten muodostuminen. pH ja lämpötila vaikuttavat merkittävästi liukenemis- ja hapetusreaktioihin.

Pilkkominen ja puskurinvaihto:

Syaanibromidipilkkomista käytetään poistamaan N-terminaalista aloittavaa aminohappoa, mutta se aiheuttaa myrkyllisyyttä ja alhaisen spesifisyyden ongelmia. Dialyysin, ultrasuodatuksen tai kokoekskluusiokromatografian avulla puskurinvaihto poistaa haitalliset reagenssit valmistautuessaan seuraaviin toimenpiteisiin.

Kromatografinen puhdistus ja saostus:

Insuliinin puhdistamiseen käytetään useita kromatografisia tekniikoita, mukaan lukien affiniteettikromatografia, ioninvaihtokromatografia, käänteisfaasikromatografia, hydrofobinen vuorovaikutuskromatografia ja kokoekskluusiokromatografia. Epäpuhtauksien poistamiseen ja proteiinien konsentroimiseen käytetään saostusmenetelmiä, kuten pH-saostusta ja sinkkikiteyttämistä.

Renaturointi:

Liuotettu proteiini laimennetaan renaturaatiopuskuriin disulfidisidosten oikean muodostumisen ja proteiinin laskostumisen edistämiseksi. Proteiinin laskostuva nestekromatografia ja dialyysi ovat myös renaturointimenetelmiä.

Entsymaattinen pilkkominen ja formulointi:

Trypsiiniä ja karboksipeptidaasi B:tä käytetään C-peptidin pilkkomiseen, jolloin muodostuu aktiivinen insuliiniheterodimeeri. Lopuksi kiteyttämistä ja lyofilisointia käytetään poistamaan jäännössuoloja ja puskureita, jolloin saadaan stabiili formulaatio. Erityisiä lisäaineita (kuten sinkkiä ja protamiinia) lisätään vastaamaan erilaisia ​​kliinisiä tarpeita.

Johtopäätös:

Insuliinin jatkokäsittely E. coli on monimutkainen. Tulevaisuudessa tulisi keskittyä näiden vaiheiden optimointiin tehokkaan ja taloudellisen tuotannon takaamiseksi kysyntään vastaamiseksi ja kustannusten alentamiseksi.

Yaohai Bio-Pharma etsii myös aktiivisesti institutionaalisia tai yksittäisiä globaaleja kumppaneita ja tarjoaa alan kilpailukykyisimmän palkkion. Jos sinulla on kysyttävää, ota rohkeasti yhteyttä: [email protected]