Prosessin optimointi uudelleenrakennetun ihminkelosen puhdistamiseksi

Viime vuosina diabeteksen potilaiden kasvu on lisännyt insuliinin kysyntää, mutta edullista insuliinia on vähän saatavilla. Tehokas ja taloudellinen insuliiniproduktio on ratkaisevaa. Insuliini tuotetaan pääasiassa Escherichia coli (E. coli) -bakteereilla ja hiivalla takia niiden nopeaa kasvua ja matalaa kustannusta, mutta E. colilla on monimutkaiset jälkikäsittelyprosessit.

Yleiskatsaus jälkikäsittelyprosessista:

Rekombinantti ihmainsuliinin puhdistus E. coli sisäluokista sisältää useita vaiheita, mukaan lukien kerääminen, pesu, dissoluointi ja oksidointi, leikkaus, tamperevaihde, kromatografisen puhdistuksen, sedimentaation, renatuuraation, enzyymiliekkaushun ja kaavaamisen.

Yaohai Bio-Pharmalla on laaja kokemus rekombinantin insuliinin tuotannossa ja puhdistuksessa sekä eksperttiprojektiryhmä, jotka varmistavat insuliinin tuotannon korkealla tehokkuudella. Satojen projektien perusteella Yaohai yhteenvetoaa, miten rekombinantin ihmainsuliinin jälkikäsittelyprosessia voidaan optimoida.

Sisällyspainioiden hajottaminen ja pesu:

Soluja hajoitetaan mekaanisilla menetelmillä (kuten ultralliseksi, korkean paineen homogeenoinnilla) tai lysoosinikäsittelyllä, jota seuraa pesupuskurit (joissa on ureaa, Triton X-100:ta jne.) saastumisten poistamiseksi. Pesun aikana parametreja on optimoitava varmistaakseen proteiinien laadun samalla kun kustannukset hallitaan.

Sisällyspainioiden dissoluointi ja oksidointi:

Korkeakonseraatioiset avaimenvoimat (kuten gvaanidiinkloridi ja urea) käytetään sisällyspainioiden dissoluointiin, ja dithiothreitioli tai β-merkaptietanol lisätään välttääkseen väärän disulfidiparien muodostumisen. pH ja lämpötila vaikuttavat merkittävästi dissoluointi- ja oksidointireaktioihin.

Jako ja puskurienvaihto:

Syanogeeniibromiidiyhdistymisen avulla poimitaan N-terminaalinen alkioaminoacidit, mutta se aiheuttaa myrkyllisyysongelmia ja on alhaisen spesifisuuden vuoksi haastavaa. Puhdistusvaihtoehtoja kuten dialyysejä, ultrafiltraatiota tai kokemukseen perustuvaa kromatografiaa käytetään puhdistamaan haitalliset reagentit seuraavien toimintojen valmisteluksi.

Kromatografinen puhdistus ja sedimentointi:

Useita kromatografisia menetelmiä käytetään insuliinin puhdistamiseen, mukaan lukien affiniikkromatografia, ionivaihduskromatografia, käänteisfasikromatografia, hydrofoobinen interaktiokromatografia ja kokemukseen perustuva kromatografia. Sedimentointimenetelmiä, kuten pH-sedimentointia ja tseti-kristallointia, käytetään saumattomuuksien poistamiseen ja proteiinien keskittämiseen.

Uudelleenkatkerautuminen:

Hajotettu proteiini diluoitiin uudelleenkatkerautumisbutterissa edistääksesi oikeiden disulfidiparien ja proteiininkatkerautumisen muodostumista. Proteiininkatkerautumiseen liittyvä vetykromatografia ja dialyyssi ovat myös menetelmiä, joita käytetään uudelleenkatkerautumiseen.

Enzyymiliekko ja kaavaukset:

Trypsini ja karboksipeptidasi B käytetään C-peptidiin leikkelemiseen, mikä muodostaa aktiivisen insuliinin heterodimerin. Lopuksi kirstallisoiminen ja lyofilisointi käytetään jäämien ja puskurien poistamiseen, valmistellakseen vakiintunut kaavake. Tiettyjä lisäaineita (kuten sinkki ja protamiini) lisätään täyttääkseen erilaiset klinikoiden tarpeet.

Yhteenveto:

Insuliinin jälkikäsittely E. coli on monimutkainen. Tulevaisuuden tulee keskittyä näiden vaiheiden optimointiin tehokkaan ja taloudellisen tuotannon saavuttamiseksi pyydetyn määrän mukaiseksi ja kustannusten alentamiseksi.

Yaohai Bio-Pharma etsii myös aktiivisesti maailmanlaajuja instituutionaalisia tai yksilöllisiä kumppaneita ja tarjoaa kilpailukykyimpien palkkioita teollisuudessa. Jos sinulla on kysymyksiä, ota meihin iloisin yhteyttä: [email protected]