E. coli solujen kokonaisuuden optimointi biofarmaseurantoon

Biofarmasektoriin liittyvissä tutkimuksissa Escherichia coli (E. coli) on keskeinen iskutin rekombinanttien proteiinien ilmaisessa. E. colin solusolu on ratkaiseva tekijä proteiinien tuotannossa, laadussa ja kustannuksissa. Solusulu perustuu enimmäkseen sisäisen (IM) ja ulkoisen (OM) membraanien rakenteeseen ja toimintaan.

Yaohai Bio-Pharmailla on 15 vuotta kokemusta E. colin fermentaatiosta ja rekombinanttien proteiinien ilmaisemisesta. Käytämme useita strategioita korkean solusolun ylläpitämiseksi, mikä mahdollistaa plasmidin tuotteen yli 1 g/L alle 30 tunnin kasvatuskiertoon. Hyödyntämällä laajaa kokemustamme mikrobien ilmaisemisesta Yaohai Bio-Pharmalla on kehitetty useita tehokkaita strategioita E. colin solusolun seurantaan ja parantamiseen biofarmaseotteiden tuotannossa.

Tekniikat E. colin solusolun seuraamiseksi

Silmäpisteytös: Käyttää fluoresoivia väyriä erottamaan solun tilat, kuten propidium iodide soluviiskauden tunnistamiseksi ja SYTO9 OM:n läpäisyyden arvioimiseksi. Vaatii kuitenkin korkean hinnan värileimoista ja monimutkaisia operaatioita.

Värimittausmenetelmät: Peilivät solulysisi havaitsemalla DNA-totaalia, enzyymiaktiiveisuutta jne. supernaatissa, kuten käyttämällä PicoGreen reagenttipakettia ja alkalifosfaasi-aktiivisuuden analyysit. Nämä menetelmät ovat kuitenkin rasitteellisia ja vaativat kalliita reagenteja.

Korkean suorituskyvyn nesteseparointi: Käytetään ulkoisten tuotteiden koncentraatioiden offline-tunnistamiseen arvioimaan OM:n vuotoisuutta. Sen automaatio on kuitenkin monimutkainen ja analyysiaika pitkä.

Vibraatiopetrallusmenetelmät: Kuten lähijohde- ja keskijohde-spektroskopiat, joilla on potentiaalisia sovelluksia, mutta niissä on voitettava spektralinen häiriö ja datanalysin haasteet.

Dielektrinen spektroskopia: Arvioi kuorenpinnan kokonaisuutta mitittämällä solujen emulsioimpeditanssia, mikä mahdollistaa reaaliaikaisen verkkovalvontaa. Se on kuitenkin herkkä häiriöille ja kalibrointi on vaikeaa.

Biosensorit: Nämä voivat havaita aineita, jotka vajoavat solujen tai periplaasin sisältä, mutta niissä on ongelmia, kuten sensorien uudelleenkäyttöön liittyvät vaikeudet.

Viskositeettimittaukset ja tiheyden mittaukset: Nämä ovat alhaisia hinnaltaan ja nopeita analysoinnissa, mutta ne eivät ole valikoivia ja monipariskuntatietojen huomioiminen on tarpeellista arvioinnissa.

Tekijät, jotka vaikuttavat solukokonaisuuteen

Lajirakennemuutos: Muuttaa OM-kokonaisuutta geenimuunnoksella, esimerkiksi lipoproteiinigenien mutaatiolla, mutta se voi vaikuttaa lajien kasvuun.

Indusoitu stressi: Uudelleenlaskettujen proteiinien ylikielto johtaa metaboliseen taakan, mikä vaikuttaa solun fyysiologiaan. Siksi ilmaisitasojen kohtuullinen säätely on välttämätöntä.

Alustekorannikko: Molemmat liian korkeat ja liian alhaiset rannikkotasoja vaikuttavat solulihdostaan ja OM-kokonaisuuteen.

Lämpötila ja ilmastonkäyttö: Korkeat lämpötilat ja alhainen hapon saatavuus lisäävät ilmaisujen stressiä ja OM-vuotoja vastaavasti, mutta tarkat vaikutukset vaihtelevat.

Osmoottiset menetelmät: Nämä käytetään periplaasmisten proteiinien vapauttamiseen, mutta ne vahingoittavat solun elvyyskykyä, mikä rajoittaa niiden käyttöä.

Johtopäätös Tulevaisuuden tutkimuksen tulisi meneä syvemmälle kuolonhoitojen mekanismien ja ehdoitten analysointiin, jotta solukalvojen kokonaisuutta voidaan hallita tarkemmin. Valvontamenetelmien optimointi ja vaikuttavien tekijöiden analysointi odotetaan parantavan tuotteen laatua, mikä edistää biofarmaseutisten teollisuuden kehitystä.

Hakemme myös aktiivisesti globaaleja instituutionaalisia tai yksilöllisiä kumppaneja. Tarjoamme alan kilpailukykyimpiä palkkioita. Jos sinulla on mitään kysymyksiä, ota meihin yhteyttä ilman epäröintiä osoitteeseen [email protected]