E. coli -solujen eheyden optimointi Biopharman tuotantoa varten

Biofarmaseuttisten tuotteiden alalla Escherichia colilla (E. coli) on elintärkeä rooli isäntänä rekombinanttiproteiinien ilmentymisessä. E. colin solujen eheys on ratkaisevan tärkeä proteiinisaannon, laadun ja tuotantokustannusten kannalta. Tämä eheys koskee ensisijaisesti sisäkalvon (IM) ja ulkokalvon (OM) rakennetta ja toimintaa.

Yaohai Bio-Pharmalla on 15 vuotta E. colin fermentaatiota ja rekombinanttiproteiinin ilmentämistä. Käytämme erilaisia ​​strategioita säilyttääksemme korkean E. colin solun eheyden, plasmidisaanto ylittää 1 g/l 30 tunnin viljelysyklissä. Yaohai Bio-Pharma on tiivistynyt laajaan kokemukseen mikrobien ilmentämisestä, ja se on koonnut yhteen useita tehokkaita strategioita seuratakseen ja parantaakseen E. colin solujen eheyttä biofarmaseuttisen tuotannon aikana.

Tekniikat E. colin solujen eheyden monitoroimiseksi

Virtaussytometria: Käyttää fluoresoivia väriaineita solutilojen erottamiseen, kuten propidiumjodidia solujen elinkelpoisuuden havaitsemiseen ja SYTO9:ää OM-läpäisevyyden arvioimiseen. Se vaatii kuitenkin korkeita tahroja ja monimutkaisia ​​operaatioita.

Kolorimetriset menetelmät: Heijasta solujen hajoamista havaitsemalla DNA-sisältö, entsyymiaktiivisuudet jne. supernatantista, kuten käyttämällä PicoGreen-reagenssipakkausta ja alkalisen fosfataasin aktiivisuusmäärityksiä. Nämä menetelmät ovat kuitenkin hankalia ja vaativat kalliita reagensseja.

Korkean suorituskyvyn nestekromatografia: Käytetään solunulkoisten tuotteiden pitoisuuksien offline-tilassa havaitsemiseen OM-vuodon arvioimiseksi. Silti sen automatisointi on monimutkaista ja analysointiaika pitkä.

Värähtelyspektroskopiatekniikat: Kuten lähi-infrapuna- ja keski-infrapunaspektroskopia, joilla on potentiaalisia sovelluksia, mutta jotka edellyttävät spektrihäiriöiden ja data-analyysin haasteiden voittamista.

Dielektrinen spektroskopia: Arvioi kalvon eheyden mittaamalla solususpensioiden impedanssia, mikä mahdollistaa reaaliaikaisen online-valvonnan. Se on kuitenkin herkkä häiriöille ja kalibrointi on vaikeaa.

Biosensorit: Voivat havaita yhdisteet, jotka ovat vuotaneet solujen sisältä tai periplasmasta, mutta kohtaavat ongelmia, kuten anturin regeneraatioongelmia.

Viskositeetti- ja tiheysmittaukset: Alhaiset kustannukset ja nopeat analyysit, mutta selektiivisyys puuttuu ja vaatii usean erän tietojen huomioon ottamista arvioimiseksi.

Solun eheyteen vaikuttavat tekijät

Kantatekniikka: Muuttaa OM:n eheyttä geenitekniikan avulla, kuten mutatoimalla lipoproteiinigeenejä, mutta saattaa vaikuttaa kannan kasvuun.

Indusoitu stressi: Rekombinanttiproteiinien yli-ilmentyminen johtaa aineenvaihduntataakkaan, joka vaikuttaa solufysiologiaan. Siksi ilmentymistasojen kohtuullinen säätely on välttämätöntä.

Substraatin syöttönopeus: Sekä liian korkeat että alhaiset syöttönopeudet vaikuttavat solujen hajoamiseen ja OM-eheyteen.

Lämpötila ja ilmastus: Korkeat lämpötilat ja alhainen hapen saatavuus lisäävät ilmentymisstressiä ja vastaavasti OM-vuotoa, mutta erityisvaikutukset vaihtelevat.

Osmoottiset aineet: Käytetään vapauttamaan periplasmisia proteiineja, mutta vahingoittavat solujen elinkelpoisuutta rajoittaen niiden käyttöä.

Johtopäätös Tulevaisuuden tutkimuksessa on syvennettävä kalvon korjauksen mekanismeja ja olosuhteita, jotta solukalvon eheys voidaan hallita tarkasti. Valvontamenetelmien optimoinnin ja vaikuttavien tekijöiden analysoinnin odotetaan parantavan tuotteiden laatua ja siten edistävän biolääketeollisuuden kehitystä.

Etsimme myös aktiivisesti institutionaalisia tai yksittäisiä globaaleja kumppaneita. Tarjoamme alan kilpailukykyisimmän palkkauksen. Jos sinulla on kysyttävää, ota rohkeasti yhteyttä osoitteeseen [email protected]