Σε σύγκριση με τη διαδικασία δύο βημάτων enzymatic capping, η μέθοδος μιας φάσης συνδιαστικής εγκαθίστωσης μπορεί να μειώσει σημαντικά το ρούτο της διαδικασίας. Η μέθοδος είναι αποτελεσματική και περιλαμβάνει την προσθήκη αναλόγων κάπου στην αντίστροφη μεταγωγή in vitro (IVT). Οι ανάλογοι κάπος μπορούν να εισαχθούν από την αρχή της μεταγωγής και μετά την ολοκλήρωση της μεταγωγής μπορεί να παραχθεί mRNA με καποειδή δομή. Τα τρίτης γενιάς ανάλογοι κάπος μπορούν να αποφύγουν την αντίστροφη εγκαθίστωση και να προσθέσουν άμεσα τη δομή Cap 1 στο προϊόν μεταγωγής.
Για λογαριασμό της ανοσογεννητικότητας και της αποδοτικότητας μετάφρασης του mRNA εντός του οργανισμού, ο προσαρμοσμένος IVT (In Vitro Transcription) προβλέπει συχνά τη χρήση τροποποιημένων NTPs. Κοινές τροποποιημένες νουκλεοτιδίες είναι η ψευδοϋριδίνη (Ψ), η N1-μεθυλ-ψευδοϋριδίνη (N1Ψ) και η 5-μεθυλ-κυτινίδα (5mC).
Σχήμα: Διάγραμμα αντιδράσεων συνδιαμόρφωσης και καταστέγασης του mRNA
Λεπτομέρειες Υπηρεσίας
Υπηρεσία |
Λεπτομέρειες Υπηρεσίας |
Περίοδος Παράδοσης (εργασιακή μέρα) |
Συνδιαμόρφωση καταστέγασης |
Αντίδραση in vitro μετάφρασης (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Τροποποιήσεις νουκλεοτιδίων (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Αφαίρεση προτύπου DNA (DNase I) |
Βελτιωμένες συνθήκες IVT - προαιρετικό |
Σχεδιασμός και βελτιστοποίηση των συστατικών της αντίδρασης |
3-7 |
Οι Προσφερόμενες Ικανότητες
- Διαφορετικές Στρατηγικές Παραλλαγής Νουκλεοτιδών
Πολλαπλές επιλογές στρατηγικών τροποποίησης νουκλεοτιδών μπορούν να βελτιώσουν την έκφραση πρωτεΐνων.
- Βελτιωμένο Σύστημα Αντίδρασης
Επιτύχεια υψηλότερο λόγο μεταφοράς και υψηλή αποτελεσματικότητα κάλυψης.
- Σταθερή Διαδικασία Κάλυψης
Επιτύχεια λόγου κάλυψης πάνω από 95%.
- Αυστηρή ελέγχωση της RNase
Πρόληψη αποτελεσματικής διάβρωσης του mRNA με αυστηρό έλεγχο της RNase στο πειραματικό περιβάλλον και τα υλικά χρήσης.
Μελέτη περιπτώσεων
Το Yaohai Bio-Pharma έχει δημιουργήσει έναν ωριμό πλατφόρμα διαδικασίας συνδιατριβικής κάλυψης, χρησιμοποιώντας καθαρούς αναλόγους κάπ για να προστεθεί άμεσα η δομή Cap1 ενώ εξαφανίζεται η αντίστροφη κάλυψη. Μετά από την προεπεξεργασία δειγμάτων κατά τις προδιαγραφές και την ανίχνευση με καπιλλιακή ηλεκτροφόρηση (CE), ο λόγος κάλυψης του mRNA της πρωτεΐνης ενισχυμένου πράσινου φλεγμονικού πρωτεΐνου φωτισμού (eGFP) μπορεί να φθάσει πάνω από 95%.
αποτελεσματικότητα κάλυψης eGFP mRNA πάνω από 95%
Το mRNA eGFP και το mRNA mCherry που ετοιμάστηκαν με συνδιαγραφικό καπελό εισαχθούν αντίστοιχα στα κύτταρα 293T, και παρατηρείται ισχυρό φωτεινό σήμα μετά από 48 ώρες, υποδηλώνοντας ότι το mRNA εκφράζεται αποτελεσματικά στα κύτταρα 293T.
Εκφράση του mRNA eGFP και του mRNA mCherry στο κύτταρο 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
