Σχετικά με τη μαζική παραγωγή mRNA, η μεταγραφή in vitro (IVT) είναι μια αποτελεσματικότερη και πιο εξελιγμένη μέθοδος. Η αντίδραση IVT χρησιμοποιεί γραμμικοποιημένο πλάσμιδο DNA που περιέχει τον προωθητή T7 ως πρότυπο, και το mRNA συντίθεται με τη χρήση νουκλεοτιδών τριφοσφάτων (NTPs) ως υλικών στην παρουσία της πολυμεράσης RNA T7.
Η τροποποίηση νουκλεοτιδών είναι μια διασπασματική εξέλιξη στην εξερεύνηση του mRNA, όπου τα μη τροποποιημένα μόρια mRNA αναγνωρίζονται από εσωτερικούς αισθητήρες RNA για να ενεργοποιηθεί η φυσική ανοσοποίηση. Για λογαριασμό της ανοσοποιητικής αντιδράσεως του mRNA μέσα στο ζωντανό οργανισμό και την αποδοτικότητα μετάφρασης, ο προσανατολισμός IVT χρησιμοποιεί συνήθως κάποιους τροποποιημένους NTPs, και κοινοί τροποποιημένοι νουκλεοτιδοί είναι ο ψευδοϋριδινιο (Ψ), ο N1-μεθυλ-ψευδοϋριδινιο (N1Ψ) και ο 5-μεθυλκυτοσίνιο (5mC).
Διαδικασία Εξωτερικής Μεταφοράς mRNA
Διάγραμμα αντίδρασης εξωτερικής μεταφοράς (IVT)
Λεπτομέρειες Υπηρεσιών
Επιλογές Υπηρεσίες |
Λεπτομέρειες Υπηρεσίας |
Περίοδος Παράδοσης (εργασιακή μέρα) |
Μεταφορά in vitro (IVT) |
IVT, εξωτερική μεταφορά |
1 |
| Τροποποιήσεις νουκλεοτιδών (Ψ/Ν1Ψ/5mC, κλπ.) |
| Αφαίρεση προτύπου DNA (DNase I) |
Βελτιωμένες συνθήκες IVT - προαιρετικό |
Σχεδιασμός και βελτίωση συστατικών αντίδρασης IVT |
2-5 |
Οι Προσφερόμενες Ικανότητες
- Διαφορετικές Στρατηγικές Παραλλαγής Νουκλεοτιδών
Βελτίωση της σταθερότητας mRNA και της έκφρασης πρωτεΐνης μέσα στο ζωντανό οργανισμό.
- Σκληρή σχεδίαση και βελτιωμένο δοκιμαστικό πρότυπο
η παρασκευή κομμάτιων mRNA μέχρι 10kb μπορεί να επιτευχθεί.
Με την βελτίωση των συνθηκών αντιδράσεως IVT, ο ρυθμός εγγραφής φθάνει μέχρι 1:200.
- Αυστηρή ελέγχωση της RNase
Αυστηρός έλεγχος της RNase μέσω εργαστηριακού περιβάλλοντος και υλικών μπορεί να προλάβει αποτελεσματικά την διάσπαση του mRNA.
Μελέτη περιπτώσεων
Το τρέχον σύστημα αντιδράσεως IVT έχει γενικά βελτιωθεί για συνθετικά συστήματα με μέγεθος περίπου 100 ντι., όχι για mRNA τυχαίας μήκους. Μιας και το μεγαλύτερο το μήκος της αλληλουχίας mRNA, τόσο πιο δύσκολο είναι να εγγραφεί και τόσο πιο εύφρακτο σε διάσπαση.
Για να προετοιμάσουν εξαρτημένα mRNA ακολουθίες με μήκος περίπου 10 kb, το Yaohai Bio-Pharma έχει επιτύχως προετοιμάσει υψηλής ποιότητας δείγματα με υψηλό λόγο μεταφώνησης 1:135 και έχει αποκτήσει 135 μg αρχικά καθαροποιημένων προϊόντων mRNA μετά τη μεταφώνηση in vitro με 1 μg γραμμικοποιημένου πλάσμιδα μέσω αυστηρής σχεδιασμού πειραμάτων, συνεχούς βελτίωσης των συνθηκών αντιδράσεων και αυστηρής ελέγχου της RNase.
αναγνώριση mRNA (Ηλεκτροφόρηση σε Αγαρόζη)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
