Σχετικά με την παρασκευή σε μπατσά των προδιαγραφών RNA, μια συχνά χρησιμοποιούμενη μέθοδος είναι η in vitro εγγραφή (IVT). Η αντίδραση IVT χρησιμοποιεί γραμμικοποιημένο DNA πλάσμιδο που περιέχει τον προμηθέα T7 ως πρότυπο και συντάσσει ένα προηγούμενο RNA με τριφοσφάτους νουκλεοτιδίων (NTPs) ως ισχύον στην παρουσία του πολυμεράση RNA T7.
Οι μέθοδοι in vitro κυκλοφορίας περιλαμβάνουν χημική σύζευξη, ενζυματική σύζευξη και μέθοδο permuted intron-exon (PIE). Η χημική σύζευξη και η ενζυματική σύζευξη είναι κατάλληλες για την κυκλοφορία μικρότερων RNA. Όταν το κομμάτι είναι μεγαλύτερο από 100 nt, ο ρυθμός κυκλοφορίας θα μειωθεί σημαντικά. Σε αντίθεση, η μέθοδος νυκλεάσης με βάση το σύστημα PIE μπορεί να επιτύχει κυκλοφορία ακολουθιών 8 kb.
Υπό την καταλύση του γυανοσίνης τριφωσφάτη (GTP), η δομή PIE υποβάλλεται σε κυκλοποίηση εξωτροχιαστικών ακολουθιών. Συνδυασμένη με μια λογική στρατηγική για την αύξηση της ταχύτητας κυκλοποίησης, η Yaohai Bio-Pharma μπορεί να επιτύχει κυκλοποίηση ακολουθιών μέχρι και 4 kb, με αποδοτικότητα κυκλοποίησης πάνω από το 80%.
Η αντίδραση κυκλοποίησης του RNA ρέει ως εξής:
Το προκάτιο RNA συντέθηκε με την εκτός ανθρώπων μεταφορά, και το συστατικό PIE ολοκληρώνει την αυτοσυσπλοκή υπό την καταλύση του GTP για να δημιουργήσει circRNA.
Λεπτομέρειες Υπηρεσιών
| Διαδικασία |
Λεπτομέρειες Υπηρεσίας |
Περίοδος Παράδοσης (εργασιακή μέρα) |
| Μετάφραση εκτός οργανισμού και κυκλοφορία |
Επιβεβαίωση συστήματος αντίδρασης |
1-2 |
| Αντιδράσεις Μετάφρασης Έξω από το Σώμα και Κυκλοποίησης |
| Χονδροποίηση με RNase R |
| Βελτιωμένη αντίδραση |
Σύνθεση Αντίδρασης, Βελτιωμένος Χρόνος |
2-5 |
Οι Προσφερόμενες Ικανότητες
- Σκληρή σχεδίαση και βελτιωμένο δοκιμαστικό πρότυπο
Μπορεί να επιτευχθεί κυκλική RNA μέχρι 4 kb.
- Υψηλή αποτελεσματικότητα κυκλικοποίησης
Μπορεί να επιτευχθεί ρυθμός κυκλικοποίησης πάνω από το 80% μέσω μιας λογικής στρατηγικής βελτιωμένης ακολουθίας.
- Αυστηρή ελέγχωση της RNase
Μέσω αυστηρής ελέγχωσης των RNases στο πειραματικό περιβάλλον και τα υλικά, η κατάρρευση της RNA ελέγχεται αποτελεσματικά.
Μελέτη περιπτώσεων
Εξωτερική κυκλικοποίηση και ενίσχυση circRNA
Με βάση το σύστημα PIE, το Yaohai Bio-Pharma έχει βελτιώσει την ακολουθία της circRNA, με ρυθμό κυκλικοποίησης πάνω από το 80% με αγαρόζηλη ηλεκτροφόρηση (AGE). Χρησιμοποιώντας RNase R για να ενισχύσετε την circRNA, τα αποτελέσματα της ηλεκτροφόρησης E-gel δείχνουν ότι ο γραμμικός προδιάστημα RNA κατατρέπεται, και μετά από περαιτέρη καθαρισμού, μπορεί να αφαιρεθεί το μεγαλύτερο μέρος της κοπτές circRNA. Η λύση καθαρισμού αναπτύχθηκε από το Yaohai Bio-Pharma.
Εξωτερική κυκλοφορία και ενίσχυση circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
