Αναλυτικά Δοκιμιών Ισχύος Βασισμένα σε Κύτταρα
Η Σημασία της Ανάλυσης Δύναμης mRNA
Με την γρήγορη ανάπτυξη των εμβολίων και θεραπειών με βάση το mRNA, χρειάζεται ένα συγκεκριμένο πλήθος μεθόδων ανάλυσης για να δοκιμαστεί η δύναμη (ορισμός της βιολογικής δραστηριότητάς τους), περιλαμβανομένης της αποδοτικότητας μετάφρασης του mRNA. Αυτές οι μεθόδοι είναι συνήθως βασισμένες στην μεταφορά κυττάρων και στις λειτουργικές αναλύσεις του στόχιου πρωτεΐνης.
Το Yaohai Bio-Pharma προσφέρει αναλύσεις δύναμης με βάση κυττάρα για φαρμακευτικές ουσίες mRNA ή προϊόντα LNP, περιλαμβανομένης της μεταφοράς κυττάρων (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 κυττάρων κλπ.) και αναλύσεις ELISA ή Western Blotting (WB).
Νομικά Απαιτήματα για τις Αναλύσεις Δύναμης
Σύμφωνα με τις ρυθμιστικές εξετάσεις της ΟΟΥ, «Η ισχύς κάθε αποθήκης του τελικού εμβολίου θα πρέπει να οριστεί με τη χρήση ενός κατάλληλου και επικυρωμένου συναρτησιακού μεθόδου(ων). Οι δυνατές in vitro δοκιμές ισχύος μπορεί να περιλάβουν συστήματα μεταφοράς με βάση κύτταρα ή ανυδρούς δοκιμαστικούς τεστ.» Και η USP προτείνει ένα «δοκιμαστικό με βάση κύτταρα» για την εξέταση της ισχύος του mRNA, δηλαδή, η εκφώνηση του στόχου πρωτεΐνης.
Αναλυτική Μέθοδος
|
Ανάλυση
|
Μέθοδοι
|
|
Δοκιμές Ισχύος
|
Μεταφορά με βάση κύτταρα και αναγνώριση στόχου πρωτεΐνης:
κύτταρα 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, κλπ.
|
Διαδικασία
Βήμα 1. Μεταφορά με βάση κύτταρα με mRNA ή mRNA-LNP
Τα κύτταρα κουλτιβούνται και μεταφέρονται με mRNA ή mRNA-LNP. Συγκεκριμένα, το mRNA μεταφέρεται μετά την ανάμειξή του με ένα φάρμακο μεταφοράς, ενώ το mRNA-LNP μεταφέρεται άμεσα στα κύτταρα. Μετά από 24-48 ώρες, εκθαρρύνεται ο υπερβολικός υπολείμματας που περιέχει την εκφωνημένη πρωτεΐνη με τη χρήση κεντριτικής.
Βήμα 2. Συναρτησιακές Δοκιμές της Στόχου Πρωτεΐνης
Εκτελέστε δοκιμές ELISA ή WB για να αξιολογήσετε τη λειτουργική συνδεσιμότητα των προτύπων πρωτεΐνων.
Μελέτη περιπτώσεων
Δοκιμές Δύναμης Βασισμένες σε Κύτταρα για δείγματα mRNA
Το Yaohai-BioPharma έχει αναπτύξει μέθοδο δοκιμών δύναμης βασισμένη σε κύτταρα για mRNA, που περιλαμβάνει κουλτούρα κυττάρων, μεταφορά κυττάρων και λειτουργικές δοκιμές πρωτεΐνων. Μεταφέραμε eGFP mRNA, mCherry mRNA, luciferase mRNA, spike protein mRNA σε κύτταρα 293T, και εντόπισαμε τις στόχο πρωτεΐνες μέσω φωτιστικών, φωτεινών ή χρωματικών σημάτων, WB, ELISA.
Δοκιμές Δύναμης Βασισμένες σε Κύτταρα για Προϊόντα mRNA από το Yaohai Bio-Pharma
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
