N-গ্লাইকোসিলেশন সাইট অকিউপেন্সি গ্লাইকোপ্রোটিনের একটি ফিজিওলজিক্যাল বৈশিষ্ট্য এবং মূলত N-গ্লাইক্যান উৎপাদন করে। Yaohai Bio-Pharma’s N-গ্লাইকোসিলেশন সাইট অকিউপেন্সি এনালাইসিস সার্ভিস Liquid Chromatography-Electrospray Ionization Mass Spectrometry-Mass Spectrometry (LC-ESI-MS/MS) ব্যবহার করে ডাইজেস্ট, রিলিজ, এনরিচমেন্ট এবং এনালাইসিস করে।
আমরা বিভিন্ন বড় অণুর প্রোটিন গঠন চিত্রণে জড়িত ছিলাম, যাতে রিকম্বিন্যান্ট সাবইউনিট ভ্যাকসিন, ন্যানোবডিস/VHHs/ এক-ডোমেইন অ্যান্টিবডি (sdAbs), অ্যান্টিবডি ফ্র্যাগমেন্ট, হরমোন/পিপটাইড, সাইটোকাইন, গ্রোথ ফ্যাক্টর (GF), এনজাইম, কলাজেন ইত্যাদি অন্তর্ভুক্ত আছে।
N-গ্লাইকোসিলেশন সাইট অকিউপেন্সির জন্য নিয়ন্ত্রণ প্রয়োজন
ICH Q6B গাইডলাইন অনুযায়ী, "গ্লাইকোপ্রোটিনের জন্য, কার্বোহাইড্রেট প্রমাণ (নির্মূল চিনি, অ্যামিনো চিনি এবং সিয়ালিক এসিড) নির্ধারণ করা হয়। এছাড়াও, কার্বোহাইড্রেট চেইনের স্ট্রাকচার, অলিগোস্যাকারাইড প্যাটার্ন (এন্টেনারি প্রোফাইল), এবং পলিপেপটাইড চেইনের গ্লাইকোসিলেশন সাইট(স) সম্ভবত সর্বোচ্চ পরিমাণে বিশ্লেষণ করা হয়।"
বিশ্লেষণাত্মক পদ্ধতি
বিশ্লেষণ |
পদ্ধতি |
এন-গ্লাইকোসিলেশন সাইট অকিউপ্যান্সি |
ডিগ্লাইকোজাইলেস এবং প্রোটিনেজ ডাইজেস্টের পর এলসিএমএস |
প্রক্রিয়া
১. প্রোটিন ডাইজেস্টিভ প্রোটিন থেকে ছোট পিপটাইড ফ্র্যাগমেন্ট উৎপাদনের জন্য।
২. এন্ডোগ্লাইকোসিডেজ H বা PNGase F ব্যবহার করে N-গ্লাইক্যান মুক্তি। এন্ডোগ্লাইকোসিডেজ H এন-লিঙ্কড গ্লাইক্যানের কোরে দুটি GlcNAc রেজিডিউ মধ্যে বন্ধন কাটে, যখন PNGase F একটি গ্লাইকোঅ্যামিডেজ যা GlcNAc এবং Asn এর মধ্যে বন্ধন কাটে, সম্পূর্ণ চিনি চেইন মুক্তি দেয় এবং Asn কে ১-ডা ভারবৃদ্ধির সাথে Asp এ রূপান্তরিত করে।
৩. HILIC (হাইড্রোফিলিক ইন্টারঅ্যাকশন লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি) ব্যবহার করে N-গ্লাইকোপিপটাইড এনরিচমেন্ট।
৪. LC-ESI-MS/MS ব্যবহার করে N-লিঙ্কড গ্লাইকোসিলেশন সাইট ওকিউপেন্সি বিশ্লেষণ।