রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিনগুলিতে বাইরের অ্যামিনো এসিড সাইড চেইনের অক্সিডেশন ঘটে থাকে, যেমন ট্রাইপ্টোফ্যান (Trp) এবং মেথিওনাইন (Met), যা প্রোটিনের ভৌত-রসায়নিক বৈশিষ্ট্য পরিবর্তন করে। এই পরিবর্তনগুলি প্রভাবিত প্রোটিনের জৈব কার্যকলাপ পরিবর্তনে অবদান রাখতে পারে, যেমন বাঁধনের ক্ষতি, এনজাইমেটিক ক্রিয়াশক্তির হ্রাস, অপ্রত্যাশিতভাবে দ্রুত পরিষ্কার। প্রোটিনগুলি অক্সিডেটিভ বিক্রিয়ার জন্য গুরুত্বপূর্ণ লক্ষ্য কারণ তারা অক্সিডেন্টসহ দ্রুত বিক্রিয়া করে এবং কোষে, বাইরের কনেকটিভ টিশুতে এবং শরীরের তরলে প্রচুর পরিমাণে থাকে।
সুতরাং, প্রোটিন অক্সিডেশন নিরীক্ষা করা বায়োফার্মেসিউটিক্যাল উন্নয়নের জন্য গুরুত্বপূর্ণ।
যাওহাই বায়ো-ফার্মা এমিনো অ্যাসিড অক্সিডেশন বিশ্লেষণ সেবা প্রদান করে, যা তরল ক্রোমেটোগ্রাফি-ম্যাস স্পেক্ট্রোমেট্রি (LC-MS) দ্বারা এমিনো অ্যাসিড অক্সিডেশন নির্ধারণ করতে দেয়।
আমরা বিভিন্ন বড় অণুর প্রোটিন স্ট্রাকচার চর্তনে জড়িত ছিলাম, যার মধ্যে রিকম্বিন্যান্ট সাবইউনিট ভ্যাকসিন, ন্যানোবডিস/ VHHs/ সিঙ্গেল-ডোমেন অ্যান্টিবডি (sdAbs), অ্যান্টিবডি ফ্র্যাগমেন্ট, হরমোন/পিপটাইড, সাইটোকাইন, গ্রোথ ফ্যাক্টর (GF), এনজাইম, কলাজেন ইত্যাদি অন্তর্ভুক্ত।
এমিনো অ্যাসিড অক্সিডেশনের জন্য নিয়ন্ত্রণ আইন
ICH Q6B দিকনির্দেশনা অনুযায়ী, অক্সিডাইজড ফর্ম ক্রোমেটোগ্রাফিক, ইলেকট্রোফোরেটিক এবং/অথবা অন্যান্য সম্পর্কিত বিশ্লেষণ পদ্ধতি (যেমন, হাই পারফরমেন্স লিকুইড ক্রোমেটোগ্রাফি (HPLC), ক্যাপিলেরি ইলেকট্রোফোরেসিস, ম্যাস স্পেক্ট্রোমেট্রি, সার্কুলার ডায়ক্রোইজম) দ্বারা নির্দিষ্ট এবং চিহ্নিত হতে পারে।
বিশ্লেষণাত্মক পদ্ধতি
বিশ্লেষণ |
পদ্ধতি |
অ্যামিনো এসিড অক্সিডেশন |
LC-MS, রিভার্স-ফেজ হাই পারফরমেন্স লিকুইড ক্রোমেটোগ্রাফি (RP-HPLC) বা হাইড্রোফোবিক ইন্টারঅ্যাকশন ক্রোমেটোগ্রাফি হাই পারফরমেন্স লিকুইড ক্রোমেটোগ্রাফি (HIC-HPLC) এবং ম্যাস স্পেক্ট্রোমেট্রি |
বিশ্লেষণাত্মক পদ্ধতি
১. নমুনা প্রস্তুতি
2. LC-MS
3. ডেটা বিশ্লেষণ
ট্রাইপ্টোফ্যান (Trp) অমূলকগুলি বিশেষভাবে অক্সিডেশনের প্রতি ঝুঁকি নিয়ে থাকে কারণ এর গন্ধকার ইনডোল অংশটি রিয়েক্টিভ অক্সিজেন স্পিশিজ সঙ্গে উচ্চ বিক্রিয়াশীল। Trp অমূলকগুলি যখন সাধারণত প্রোটিনের তিন-মাত্রিক গঠনে ঢাকা থাকে, তখনও অক্সিডেশনের জন্য কিছু প্রয়োজনীয় ব্যবধান ঘটে।
তবে, যখন Trp অমূলকগুলি অক্সিডেশন হয়, তখন তারা মূল Trp থেকে খুবই আলग বৈশিষ্ট্য বিশিষ্ট বিভিন্ন পণ্যে রূপান্তরিত হতে পারে। Trp অক্সিডেশনের সবচেয়ে সাধারণ পথটি N-ফর্মিলকিনুরেনিনের (মাস পার্থক্য: +32) গঠন অন্তর্ভুক্ত করে।
অন্য একটি সাধারণত অক্সিডেশনযোগ্য অ্যামিনো এসিড হল মেথিওনাইন। Met অমূলকের সালফার পরমাণু এক বা দুটি অক্সিজেন পরমাণু গ্রহণ করতে পারে, যা যথাক্রমে সালফক্সাইড (মাস পার্থক্য: +16) বা সালফোন (মাস পার্থক্য: +32) গঠনের কারণ হয়। এই পরিবর্তনটি সাধারণত বেশ সাধারণ কারণ Met সাধারণত উচ্চ পৃষ্ঠের ব্যবধানে থাকে।