Цілісність мРНК
Значення аналізу цілісності мРНК
МРНК відомі своєю властивою нестабільністю та сприйнятливими до фрагментації в присутності зовнішніх факторів, особливо під час процесів транскрипції in vitro (IVT) і очищення, де всюдисущі нуклеази становлять проблему. Оцінка цілісності мРНК має вирішальне значення для подальшої розробки ліків на основі мРНК, забезпечуючи як безпеку, так і доступність продукту.
Yaohai-BioPharma надає комплексні послуги з тестування цілісності мРНК, використовуючи такі методи, як електрофорез у агарозному гелі (AGE), капілярний електрофорез (CEG) і високоефективна рідинна хроматографія (HPLC), дотримуючись суворих стандартів якості як для досліджень, так і для клінічних випробувань.
Нормативні вимоги до цілісності мРНК
Відповідно до регуляторних міркувань ВООЗ, «цілісність структури мРНК вважається критично важливим атрибутом якості для вивільнення мРНК. Таким чином, необхідний контроль цілісності мРНК, відсотка інтактної мРНК, відсотка фрагментів мРНК і так далі».
Аналітичний метод
Аналіз | Методи |
цілісність мРНК | AGE, Агарозаgелектрофорез |
CGE,Капілярний електрофорез |
CGE-LIF, електрофорез у капілярному гелі з виявленням індукованої світлом флуоресценції |
Цілісність мРНК за допомогою електрофорезу в агарозному гелі
Електрофорез у агарозному гелі є широко використовуваним методом для оцінки цілісності загальної РНК. Це передбачає прогонку зразка РНК на денатуруючому агарозному гелі, забарвленому або бромідом етидію, або SYBR Green. Денатуруючий гель, що складається з агарози, полегшує розділення РНК за розміром під час застосування електричного струму. Коли негативно заряджена РНК мігрує до позитивного кінця гелю, менші фрагменти рухаються швидше, що призводить до сортування молекул РНК за розміром.
Цілісність мРНК за допомогою капілярного гель-електрофорезу
Капілярний гель-електрофорез (CGE) є аналітичним підходом високої роздільної здатності, ключовим для визначення цілісності молекул РНК за довжиною. Ця оцінка має важливе значення для забезпечення якості, розуміння ефективності та оптимізації виробничих процесів. Подібно до електрофорезу в агарозному гелі, CGE використовує електричний струм для відокремлення фрагментів РНК на основі їх заряду та розміру. У CGE капіляр заповнений розділовою гелевою матрицею, наповненою флуоресцентним барвником. Рух РНК вздовж капіляра залежить від його розміру, і виявлення досягається за допомогою ультрафіолетових (УФ) або світлоіндукованих флуоресцентних (LIF) детекторів.
EN
