mRNA Bütünlüğü
mRNA Bütünlük Analizinin Önemi
mRNA'lar, doğal kararsızlıkları nedeniyle tanınır ve özellikle her yerde bulunan nükleazların sorun oluşturduğu in vitro transkripsiyon (IVT) ve saflaştırma işlemleri sırasında, dış faktörlerin varlığında parçalanmaya karşı hassastır. MRNA bütünlüğünün değerlendirilmesi, mRNA bazlı ilaçların daha sonraki geliştirilmesinde çok önemlidir ve hem güvenlik hem de ürün bulunabilirliği sağlanır.
Yaohai-BioPharma, agaroz jel elektroforezi (AGE), kılcal elektroforez (CEG) ve yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) gibi yöntemleri kullanarak, hem araştırma hem de klinik denemeler için sıkı kalite standartlarına bağlı kalarak kapsamlı mRNA bütünlük test hizmetleri sağlar.
mRNA bütünlüğü için Düzenleyici Gereksinimler
Dünya Sağlık Örgütü'nün düzenleyici hususlarına göre, "mRNA'nın yapısının bütünlüğü, mRNA'nın salınması için kritik bir kalite özelliği olarak kabul edilir. Bu nedenle, mRNA bütünlüğü, bozulmamış mRNA yüzdesi, mRNA fragmanlarının yüzdesi vb. için kontrol gereklidir."
Analitik metod
Analiz | Yöntemler |
mRNA bütünlüğü | AGE, Agarozgel elektroforezi |
CGE,Kapiler Elektroforez |
CGE-LIF, ışıkla indüklenen floresans algılamalı kılcal jel elektroforezi |
Agaroz Jel Elektroforezi ile mRNA Bütünlüğü
Agaroz jel elektroforezi, toplam RNA'nın bütünlüğünü değerlendirmek için yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. Bu, RNA örneğinin, etidyum bromür veya SYBR Green ile lekelenmiş, denatüre edici bir agaroz jel üzerinde çalıştırılmasını içerir. Agarozdan oluşan denatüre edici jel, elektrik akımı uygulandığında RNA'nın boyutuna göre ayrılmasını kolaylaştırır. Negatif yüklü RNA, jelin pozitif ucuna doğru ilerledikçe, daha küçük parçalar daha hızlı hareket eder ve bu da RNA moleküllerinin boyuta dayalı bir şekilde sınıflandırılmasına neden olur.
Kapiler Jel Elektroforezi ile mRNA Bütünlüğü
Kılcal jel elektroforezi (CGE), RNA moleküllerinin bütünlüğünü uzunluğa göre ölçmek için çok önemli olan yüksek çözünürlüklü bir analitik yaklaşımdır. Bu değerlendirme kalite güvencesi, potansiyelin anlaşılması ve üretim süreçlerinin optimizasyonu açısından önem taşır. Agaroz jel elektroforezine benzer şekilde CGE, RNA parçalarını yüklerine ve boyutlarına göre ayırmak için bir elektrik akımı kullanır. CGE'de bir kılcal, bir floresan boya ile aşılanmış bir ayırma jeli matrisi ile doldurulur. RNA'nın kılcal damar boyunca hareketi büyüklüğüne bağlıdır ve tespit, ultraviyole (UV) veya ışıkla indüklenen floresans (LIF) dedektörleri kullanılarak gerçekleştirilir.
EN
