U procesu pripreme in vitro transkripcije (IVT) mRNA, linearni plazmidni DNA je potreban kao šablon za IVT transkripciju uz pomoć T7 RNA polimeraze. Visokokvalitetni plazmidni DNA ključan je za in vitro transkripciju.
Na osnovu zrele platforme za usluge pripreme plazmida, Yaohai Bio-Pharma može ponuditi uslugu visokokvalitetne i standardne pripreme linearnog plazmidnog DNA za učinkovitu IVT transkripciju.
Процес | Opcionalna Usluga | Detalji usluge | Rok isporuke (radni dan) |
Priprema cirkularnog plazmita | Sinteza gene | Sinteza Gena (Trece strane) | 7-10 |
Amplifikacija Plazmida | Amplifikacija Plazmida | 2 | |
Ekstrakcija Plazmida | |||
Priprema Linearnog Plazmida | Linearizacija i očišćavanje plazmida | Linearizacija plazmida | 1 |
Ciscenje Linearnog DNA-a | |||
Kontrola kvaliteta plazmidnog DNA-a | Koncentracija čistoće | Ultravijoletna (UV) Spektrofotometrija | 1-2 |
Plazmidna konformacija | Elektroforeza u agaroznom gełu (AGE) | ||
Kapilarna elektroforeza (CE) - Opcionalno | |||
Identifikacija plazmida | Identifikacija restrikcionih enzima / AGE |
G fleksibilan odabir metoda linearizacije
Optimizacija metoda izvlačenja i očišćivanja DNA za postizanje visokih stopa oporavka.
Strogost standarda procesa, sa stopom superheliksnog konformiteta plazmid uzoraka za istraživanje preko 80%.
Visoki standardi i efikasna priprema plazmida i usluge kontrole kvaliteta za ispunjavanje eksperimentalnih potreba.
Uzimajući kao primer katalog Yaohai Bio-Pharma mRNA_luciferase, uzorak plazmida šablon za transkripciju (istraživački nivo) ima omjer superhelikse veći od 90%, linearni omjer blizu 100%, a zatim omjer transkripcije do 1:200 (linearisani plazmidni DNA:mRNA).
MRNA_luciferase koji se dobija pripremom linearizovanog plazmida kao šablona se transfirira u 293T ćelije i aktivnost enzim-substrat reakcije se procjenjuje 24 sata nakon transfekcije.
Može se detektovati jasan jak signal aktivnosti luciferaze, tj. da se luciferazni protein efikasno izražava, što ukazuje na to da čistoća transkripcijskog šablona može potpuno zadovoljiti zahtjeve za pripremom visokokvalitetnog mRNA-a.
Analiza omjera superheliksnih plazmida
Potvrda izražavanja mRNA luciferaze in vitro