U poređenju sa dvostepenom enzimatskom metodom zakupljanja, jednostepena metoda zajedničkog transkripciskog zakupljanja može značajno smanjiti proces. Metoda je rezultat-oriјentisana i podrazumeva dodavanje kap analogova u reakciju in vitro transkripcije (IVT). Kap analogovi mogu biti uvedeni na početku transkripcije, a mRNA sa kap strukturom se dobija nakon završetka transkripcije. Trenutno, treće generacije kap analogova mogu izbeći obrnuto zakupljanje i direktno dodati Cap 1 strukturu transkripcijskom proizvodu.
U vezi s imunogeneratornostiu mRNA u vivo i efikasnošću prevoda, proces IVT često koristi određene vrste modifikovanih NTP-ova, a česte modifikovane nukleotide su psevdouridin (Ψ), N1-metil-psevdouridin (N1Ψ) i 5-metilcitozin (5mC).
Slika: Dijagram kodiranja mRNA i reakcije zaklapanja
Detalji usluge
Usluga |
Detalji usluge |
Rok isporuke (radni dan) |
Kodiranje tijekom transkripcije |
Transkripcijski odgovor in vitro (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Modifikacije nukleotida (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Uklanjanje DNS šablon (DNase I) |
Optimizacija stanja IVT - opcionalno |
Dizajn i optimizacija komponenti reakcije |
3-7 |
Naše karakteristike
- Raznovrsne strategije modifikacije nukleotida
Više opcionalnih strategija modifikacije nukleotida može poboljšati izraz proteina.
- Optimizovani reakcioni sistem
Postignite visok omjer transkripcije i efikasan capping proces.
- Stabilan proces zaklapanja
Postignite stopu zaklapanja veću od 95%.
Efektivno sprijecavajte degradaciju mRNA-a strogom kontrolom RNaze u eksperimentalnom okruženju i potrošnji.
Studija slučaja
Yaohai Bio-Pharma je izgradila zrelu platformu za zaklapanje u toku transkripcije, koristeći čist cap analog kako bi se direktno dodao Cap1 struktura, pri čemu se izbjegava obrnuti proces zaklapanja. Nakon standardizovanog priprema uzoraka i detekcije kapilarne elektroforezom (CE), stopa zaklapanja mRNA-a za pojačani zeleni fluoresentni protein (eGFP) može doseći preko 95%.
efikasnost zaklapanja eGFP mRNA-a preko 95%
MRNA eGFP i mRNA mCherry pripremljeni kodavanjem uz transkripciju su transfekcijom uvedeni u 293T celije, redom, i nakon 48 sati se može primetiti jak signał fluoresencije, što ukazuje na to da je mRNA efikasno izražen u 293T celijama.
Izraz mRNA eGFP i mRNA mCherry u 293T celiji
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
