Integriteta mRNA
Pomen analize integritete mRNA
mRNA so prepoznavne po svoji inherentni nestabilnosti in so dovzetne za fragmentacijo v prisotnosti zunanjih dejavnikov, zlasti med in vitro transkripcijo (IVT) in postopki čiščenja, kjer vseprisotne nukleaze predstavljajo izziv. Vrednotenje celovitosti mRNA je ključnega pomena pri poznejšem razvoju zdravil na osnovi mRNA, ki zagotavlja varnost in razpoložljivost izdelkov.
Yaohai-BioPharma zagotavlja celovite storitve testiranja celovitosti mRNA z uporabo metod, kot so elektroforeza v agaroznem gelu (AGE), kapilarna elektroforeza (CEG) in tekočinska kromatografija visoke ločljivosti (HPLC), pri čemer upošteva stroge standarde kakovosti tako za raziskave kot za klinična preskušanja.
Regulativne zahteve za celovitost mRNA
V skladu z regulativnimi premisleki Svetovne zdravstvene organizacije se »celovitost strukture mRNA šteje za kritični atribut kakovosti za sproščanje mRNA. Zato je potreben nadzor za celovitost mRNA, odstotek nedotaknjene mRNA, odstotek fragmentov mRNA in tako naprej.
Analitična metoda
Analiza |
Metode |
celovitost mRNA |
AGE, agarozagelektroforeza |
CGE,Kapilarna elektroforeza |
CGE-LIF, kapilarna gelska elektroforeza s svetlobno inducirano fluorescenčno detekcijo |
Integriteta mRNA z elektroforezo v agaroznem gelu
Elektroforeza v agaroznem gelu je široko uporabljena tehnika za ocenjevanje celovitosti celotne RNK. To vključuje vodenje vzorca RNA na denaturirajočem agaroznem gelu, obarvanem z etidijevim bromidom ali SYBR Green. Denaturacijski gel, sestavljen iz agaroze, olajša ločevanje RNK glede na velikost ob uporabi električnega toka. Ko negativno nabita RNA migrira proti pozitivnemu koncu gela, se manjši fragmenti premikajo hitreje, kar ima za posledico razvrščanje molekul RNA glede na velikost.
Integriteta mRNA s kapilarno gelsko elektroforezo
Kapilarna gelska elektroforeza (CGE) je analitični pristop visoke ločljivosti, ki je ključnega pomena za merjenje celovitosti molekul RNA po dolžini. Ta ocena je pomembna za zagotavljanje kakovosti, razumevanje učinkovitosti in optimizacijo proizvodnih procesov. Podobno kot pri elektroforezi v agaroznem gelu CGE uporablja električni tok za ločevanje fragmentov RNK glede na njihov naboj in velikost. Pri CGE je kapilara napolnjena z matriko ločevalnega gela, prepojeno s fluorescentnim barvilom. Gibanje RNA vzdolž kapilare je odvisno od njene velikosti, detekcija pa se doseže z uporabo ultravijoličnih (UV) ali svetlobno induciranih fluorescenčnih (LIF) detektorjev.
EN
