Identifikacija in količina lipidne sestave LNP
Pomen analize lipidne sestave LNP
Lipidni nanodelci (LNP), ki obsegajo kationski lipid, holesterol, fosfolipid in PEG-konjugirani lipid, služijo kot vidni sistemi za dostavo zdravilnih produktov mRNA. Stabilnost in dvoslojna tekočina LNP sta odvisni od lastnosti in vsebnosti različnih lipidov, uporabljenih v formulacijskem sistemu. Sestava lipidov je zelo pomembna za to, kako dobro LNP dovajajo zdravila.
Yaohai-BioPharma ponuja rešitve za identifikacijo in kvantifikacijo lipidne sestave mRNA-LNP z uporabo metode tekočinske kromatografije visoke ločljivosti z detekcijo nabitega aerosola (HPLC-CAD).
Regulativne zahteve za lipidno sestavo
V skladu z regulativnimi premisleki WHO je treba "končno sestavo cepiva, vključno z lipidi, opisati skupaj s količino komponent v vsaki predstavitvi."
Analitična metoda
Analiza |
Metode |
Sestava lipidov |
HPLC v kombinaciji s Corona Charged Aerosol Detector (CAD) |
Postopek
Korak 1. Priprava lipidnega vzorca
Izbira razredčila je izjemnega pomena za analizo lipidnih komponent v zdravilih mRNA-LNP. Razredčilo mora učinkovito raztopiti vsako lipidno komponento in prekiniti kakršne koli interakcije med lipidi in inkapsulirano mRNA. Potencialna razredčila vključujejo etanol, etanol/dimetil sulfoksid (DMSO), etanol/formamid, etanol/trietilamin acetat in druge.
Korak 2. HPLC-CAD
Tekočinska kromatografija z reverzno fazo (RP-HPLC) v kombinaciji z detektorjem nabitih aerosolov (CAD) je bila vključena v testiranje lipidne sestave LNP. Glede na to, da lipidi nimajo kromoforjev in ne absorbirajo ultravijoličnega (UV) sevanja brez derivatizacije, je izhlapevanje običajno zahtevno. CAD, ki je bolj občutljiv, lahko zazna širši spekter vsebnosti lipidov. Prej je bila oblikovana in uporabljena tekočinska kromatografija ultravisoke ločljivosti (UHPLC) skupaj z metodo detektorja nabitega aerosola (CAD) in uporabljena v analizi lipidov za študije majhnih motečih RNA (siRNA) LNP.
Korak 3. Analiza podatkov
Količina vsakega lipida v vzorcu je vključevala izračune, izpeljane iz standardne krivulje, pomnožene s faktorjem redčenja. Ta postopek je dal vsebnost lipidov za vsako sestavino v vzorcu mRNA-LNP.
Primer analize lipidne sestave LNP s HPLC-CAD
Na podlagi HPLC-CAD je Yaohai-BioPharma razvila robustno metodo za analizo lipidnih komponent mRNA-LNP. Ta metoda je bila potrjena kot linearna, ponovljiva, natančna, točna in specifična za formulacije LNP, ki bi lahko podpirala razvoj procesov, razvoj formulacij, testiranje stabilnosti in sproščanje mRNA-LNP.
Kromatografski profil 4 lipidov z metodo HPLC-CAD podjetja Yaohai-BioPharma
Linearnost metode HPLC-CAD podjetja Yaohai-BioPharma (R2>0.99)
EN
