Rekombinant proteinproduksjon: Konstruerte E. coli-stammer

Escherichia coli (E. coli) har spilt en betydelig rolle i å produsere rekombinante proteiner i den biofarmasøytiske industrien, og fungerte som den første ekspresjonsvektoren for produksjon av biologisk medisin. E. coli kan skryte av rask vekst, praktisk genetisk manipulasjon og rask syntese av rekombinante proteiner, blant andre fordeler. Omfattende modifikasjoner har gjort E. coli til et optimalt valg for proteinekspresjon, noe som har ført til utformingen av ulike konstruerte stammer av E. coli.

Yaohai Bio-Pharma spesialiserer seg på å tilby one-stop outsourcing-tjenester for fermentering, rensing, formuleringsprosessutvikling og produksjon av en serie biofarmasøytiske legemidler ved bruk av E. coli-ekspresjonssystemer. Når det gjelder den omfattende erfaringen til Yaohai, oppsummerte vi at fire vanlige E. coli-stammer brukes til rekombinant proteinproduksjon og deres egenskaper.

BL 21 stamme

Avledet fra E. coli B-linjen, mangler BL21-stammen Lon-protease og ytre membranprotease OmpT. Lon-protease bryter først og fremst ned eksogene proteiner, mens OmpT hovedsakelig bryter ned ekstracellulære matriseproteiner. Fraværet av disse to nøkkelproteasene kan effektivt forhindre nedbrytning av rekombinante proteiner.

Origami-stamme

Origami-stamme, et derivat av E. coli K-12, har mutasjoner i tioredoksinreduktase og glutationreduktase, som letter dannelsen av korrekt foldede proteiner som inneholder disulfidbindinger og øker proteinløseligheten. Origami-stammen, inkludert Origami, Origami 2 og Origami B, er egnet for ekspresjon av aktive proteiner som inneholder disulfidbindinger.

SHuffle belastning

SHuffle-stamme uttrykker konstitutivt disulfidbinding-isomerasen DsbC i cytoplasmaet, og fremmer dannelsen av korrekte disulfidbindinger i oksiderte proteiner. Den fungerer også som en molekylær chaperone for proteinfolding, og hjelper til med dannelsen av riktig konformasjon.

Rosetta-stamme

Rosetta-stammen supplerer E. coli med tRNA som tilsvarer sjeldne kodoner, med sikte på å forbedre uttrykksnivået til eksogene gener, spesielt eukaryote gener, i prokaryote systemer. Avledet fra BL21 og bærer det kloramfenikol-resistente pRARE-plasmidet, supplerer det seks tRNA-er som tilsvarer sjeldne kodoner (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC og GGA) som opprinnelig var fraværende i E. coli, noe som gir et mer "universelt" proteinuttrykk.

konklusjonen

De tre hovedfaktorene for vellykket produksjon av rekombinante proteiner er verten, vektoren og kulturforholdene. Basert på en forståelse av de fysisk-kjemiske egenskapene til det rekombinante proteinet, de unike fordelene ved hver stamme og de spesifikke behovene til eksperimentet, bør den mest passende verten velges. I tillegg bør faktorer som plasmidvektorer, temperatur og induktorer optimaliseres for å forbedre proteinekspresjonen.

Yaohai Bio-Pharma søker også aktivt etter institusjonelle eller individuelle globale partnere og tilbyr den mest konkurransedyktige kompensasjonen i bransjen. Hvis du har spørsmål, kan du gjerne kontakte oss: [email protected]