Framstillingsprosessen av eGFP mRNA

Produksjonen av eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA involverer en serie molekylbiologiske teknikker for å generere et funksjonelt RNA-molekyl som kodder for uttrykket av eGFP. Innenfor området eGFP mRNA har Yaohai Bio-Pharma akkumulert omfattende erfaring i å tilpasse seg kundenes spesifikke behov. Ved å bruke vår erfaring, har vi samlet prosessflyten for å produsere EGFP mRNA.

1. Kloning av eGFP-genen : Å få tak i gensekvensen som kodder for eGFP. Denne genen klones typisk fra en eksisterende plasmidvektor eller syntetiseres kunstig basert på den kjente nukleotidsekvensen. Den klonede genen bekreftes deretter gjennom sekvensering for å sikre nøyaktighet.
2. Genoptimalisering for uttrykk : For optimal uttrykk i målsystemet (f.eks., pattedyrsceller, bakterier eller in vitro transkripsjonssystemer), kan eGFP-genen gjennomgå kodonoptimalisering. Dette innebærer å erstatte sjeldne kodoner i den opprinnelige sekvensen med mer ofte brukte i vertsorganismen, noe som øker sannsynligheten for effektiv translasjon.
3. I vitro Forberedelse av transkripsjonsmal : Når den optimaliserte genen er klar, legges den inn i en passende vektor, ofte et plasmid, som inneholder reguleringselementer nødvendige for transkripsjon (f.eks., en promotorsekvens). Dette plasmidet tjener som mal for in vitro transkripsjon.
4. I vitro Transkripsjon : Ved å bruke den forhåndsbereide plasmidmalen utføres in vitro-transkription for å syntetisere eGFP-mRNA. Denne prosessen involverer bruk av RNA-polymerase-enzym, som gjenkjenner promotorsekvensen og initierer transkripsjonen, produserer en komplementær RNA-strand til DNA-malen. Avhengig av ønsket anvendelse, kan mRNA-en bli tapt, polyadenylert og/eller modifisert for å forbedre stabilitet og oversettelseseffektivitet.
5. Renning og kvalitetskontroll : Den syntetiserte eGFP-mRNA-en rennes deretter for å fjerne eventuelle forurensninger, inkludert DNA, proteiner og frie nukleotider. Renningsmetoder kan omfatte gellelektroforese, kolonn-kromatografi eller partikkelt-basert separasjon. Etter renning analyseres mRNA-en på kvalitet, inkludert konsentrasjon, renhet og integritet, ved hjelp av teknikker som UV-Vis-spektrofotometri og gellelektroforese.
6. Lagring og levering : Den renede eGFP-mRNA lagres typisk ved lave temperaturer for å opprettholde stabilitet. For eksperimentell bruk kan mRNA leveres inn i celler ved ulike metoder, inkludert elektroporasjon, lipofeksjon eller virale vektorer, avhengig av den spesifikke anvendelsen og celletypen.
7. Ekspresjon og verifisering : Så snart den er inne i cellen, blir eGFP-mRNA oversatt til den forsterkte grønne fluoreserende protein, som kan visualiseres ved hjelp av fluoresensmikroskopi. Dette tillater verifisering av vellykket mRNA-produksjon, levering og ekspresjon.

I sammendrag omfatter produksjonen av eGFP-mRNA kloningen av genet, optimeringen av det for ekspresjon, forberedelsen av en in vitro-transkripsjonstemplate, utførelsen av transkripsjonsreaksjonen, renasjonen av den resulterende mRNA-en, og til slutt leveringen av den inn i celler for ekspresjon og verifisering.

Vi søker også aktivt globale partnere, både institusjonelle og enkeltpersoner. Vi tilbyr den mest konkurransedyktige kompensasjonen i bransjen. Hvis du har noen spørsmål, ikke nøl med å kontakte oss: [email protected]