Produksjonsprosess for eGFP mRNA

Produksjonen av eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA involverer en rekke molekylærbiologiske teknikker for å generere et funksjonelt RNA-molekyl som koder for uttrykket av eGFP. Innenfor eGFP-mRNA har Yaohai Bio-Pharma akkumulert omfattende erfaring med å imøtekomme kundenes spesifikke behov. Ved å utnytte vår erfaring har vi syntetisert prosessflyten for å produsere EGFP mRNA.

1. Kloning av eGFP-genet: Det for å få gensekvensen som koder for eGFP. Dette genet er typisk klonet fra en allerede eksisterende plasmidvektor eller syntetisert kunstig basert på den kjente nukleotidsekvensen. Det klonede genet blir deretter verifisert gjennom sekvensering for å sikre nøyaktighet.
2. Genoptimalisering for uttrykk: For optimal ekspresjon i målsystemet (f.eks. pattedyrceller, bakterier eller in vitro transkripsjonssystemer), kan eGFP-genet gjennomgå kodonoptimalisering. Dette innebærer å erstatte sjeldne kodoner i den opprinnelige sekvensen med hyppigere brukte kodoner i vertsorganismen, noe som øker sjansene for effektiv oversettelse.
3. In vitro Utarbeidelse av transkripsjonsmal: Når det optimaliserte genet er klart, inkorporeres det i en passende vektor, ofte et plasmid, som inneholder regulatoriske elementer som er nødvendige for transkripsjon (f.eks. en promotersekvens). Dette plasmidet tjener som en mal for in vitro transkripsjon.
4. In vitro Transcription: Ved å bruke den forberedte plasmidmalen utføres in vitro-transkripsjon for å syntetisere eGFP-mRNA. Denne prosessen involverer bruk av RNA-polymerase-enzymer, som gjenkjenner promotersekvensen og initierer transkripsjon, og produserer en komplementær RNA-streng til DNA-malen. Avhengig av ønsket applikasjon, kan mRNA-en avdekkes, polyadenyleres og/eller modifiseres for å øke stabiliteten og translasjonseffektiviteten.
5. Rensing og kvalitetskontroll: Det syntetiserte eGFP-mRNA blir deretter renset for å fjerne eventuelle forurensninger, inkludert DNA, proteiner og frie nukleotider. Rensemetoder kan inkludere gelelektroforese, kolonnekromatografi eller perlebasert separasjon. Etter rensing analyseres mRNA for kvalitet, inkludert konsentrasjon, renhet og integritet, ved bruk av teknikker som UV-Vis spektrofotometri og gelelektroforese.
6. Lagring og levering: Det rensede eGFP mRNA lagres vanligvis ved lave temperaturer for å opprettholde stabilitet. For eksperimentell bruk kan mRNA leveres inn i celler ved hjelp av forskjellige metoder, inkludert elektroporering, lipofeksjon eller virale vektorer, avhengig av den spesifikke applikasjonen og målcelletypen.
7. Uttrykk og bekreftelse: En gang inne i cellen blir eGFP mRNA oversatt til det forbedrede grønne fluorescerende proteinet, som kan visualiseres ved hjelp av fluorescensmikroskopi. Dette muliggjør verifisering av vellykket mRNA-produksjon, levering og ekspresjon.

Oppsummert involverer produksjonen av eGFP mRNA kloning av genet, optimalisering av det for ekspresjon, klargjøring av en in vitro transkripsjonsmal, utførelse av transkripsjonsreaksjonen, rensing av det resulterende mRNA, og til slutt levering av det til celler for ekspresjon og verifisering.

Vi søker også aktivt etter institusjonelle eller individuelle globale partnere. Vi tilbyr den mest konkurransedyktige kompensasjonen i bransjen. Hvis du har spørsmål, kan du gjerne kontakte oss: [email protected]