Innovative sammensettingsmetoder for storstilt genetisk syntese

Teknologien for å samle store DNA-fraksjoner fra bunnen av er grunnlaget for gen-syntese, og omfatter metoder som BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson-sammenstilling, CPEC og Overlap PCR. På grunn av begrensningene i dagens teknologi ved akkurat syntese av DNA på genlengde i én trinn, er det nødvendig å kombinere in vitro- og in vivo-sammenstillingsmetoder for å samle oligonukleotidfraksjoner, som er syntetisert i segmenter, til lange DNA-fraksjoner.

In vitro-sammenstillingsmetoder

De er klassifisert i ulike metoder basert på fragmentstørrelse og sekvenskarakteristikk, med en felles krav om å bruke verktøy enzym. Overlap PCR, basert på DNA polymerase-metoden, er enkel og rask i operasjonen. BioBrick- og BglBrick-metodene, som avhenger av isoschizomere, lar til standardisert montering, selv om BioBrick-metoden ikke er egnet for fusionsproteiner. Golden Gate-kloningsmetoden, basert på type IIS restriksjonsenzym, lar til effektiv naadig laking av flere fragmenter. Gibson-assemblémethode, som bruker en kombinasjon av flere verktøy enzym, lar til naadig laking med fragmentstørrelser som kan nå flere hundre kb. Standardisert design av DNA-komponenter forsterker utnyttelsesgraden av eksisterende fragmenter.

In vivo assembléeteknikker

Selv om i vitro samlet fragmenter kan nå størrelser på flere hundre kb, men mengden er ofte utilstrekkelig, noe som krever forsterkning ved hjelp av organismer som Escherichia coli. Ved sammenføyning av fragmenter over 20 kb, bruker man ofte rekombinante systemer innenfor organismer, inkludert Bacillus subtilis, gjerst og modifiserte bakterier. Gjerst, som en vanlig brukt vert, har lenge blitt kjent for sin effektive evne til homolog rekombinasjon. Den kan brukes til å samle artificielle kromosomer opp til flere megabaser (Mb) i lengde. I tillegg viser Saccharomyces cerevisiae en ekstraordinær tålmodighet mot kromosomlengde, noe som gir en teoretisk grunnlag for å bruke gjerst til å bygge ultra-lange kromosomer i høyere organismer.

Anvendelser

Yaohai Bio-Pharma bruker hovedsakelig to monteringsmetoder for genetisk syntese: ligase-montasje og DNA-polymerase-montasje. Ligase-montasjemetoden kobler overlappende og hybridiserte 5'-fosfaterte oligonukleotidfragmenter til dobbeltstreget DNA ved hjelp av DNA-ligase. Polymerase-montasjemetoden bruker DNA-polymerase til å utvide de overlappende oligonukleotidfragmentene gjennom hybridisering, og oppnår en blanding av ulike lengder, og forsterker til slutt de fullt monterte fragmentene ved hjelp av primere. Yaohai kan hjelpe kunder med å oppfylle spesifikke krav i genetisk syntese.

Vi søker også aktivt globale partnere, både institusjonelle og enkeltpersoner. Vi tilbyr den mest konkurransedyktige kompensasjonen i bransjen. Hvis du har noen spørsmål, ikke nøl med å kontakte oss: [email protected]