Fremmeting av Reporter RNA-modifiseringsmetoder

Når man velger hvilken metode for reporter mRNA-modifikasjoner som er foretrukket, finnes det ingen endelig svar, ettersom hver metode og hver reporter-gene har sine egne fordeler og relevante scenarier. Her er noen vanlige mRNA-modifiseringsmetoder og reporter-gener, sammen med deres karakteristikk og egnethet.

mRNA-modifiseringsmetoder

Metilering:

1. m6A : Associeres med mRNA-stabilitet, splicing, oversettelse og miRNA-behandling. Oppdagelsesutfordringer inkluderer抗体-valg og lokalizering.
2. 5' Cap Nm : Forsterker stabilitet, splicing, polyadenylering og kjernen eksport. Hjelper å skille mellom selv-RNA og fremmed RNA.
3. Pseudouridylering : Endrer kodoner, forsterker stabilitet og reagerer på stress. Katalyseres av pseudouridinsyntaser.

Introduksjon av ikke-naturlige nukleotider:

1. Innført under transkription med en dobbelt kjemisk modifiseringsstrategi. Den forbedrer stabilitet, effektivitet og proteinekspresjon.

Reporter gener

1. Grønn Fluoresent Protein Gen (GFP) : Fordeler: Enkel å oppdage, stabile fluoresens egenskaper, ikke giftig for celler, egnet for livecelleavbildning. Ulemper: Begrenset fluoresens intensitet.
2. Forstærket Grønn Fluoresent Protein (eGFP) : Fordeler: Over 6 ganger lysere enn villtype GFP, gjør det mer egnet som en reporter gene for å studere generespresjon, regulering, celle differensiering og proteinlokaliserings- og transportprosesser innenfor organismer.
3. Røde Fluoresente Proteiner (f.eks., mCherry) : Fordeler: Lengre eksitasjons- og emisjonsbølgelengder, resulterende i lavere bakgrunn under intracelleavbildning, fremragende fluoresens lysstyrke og fotostabilitet, og lavere cellegiftighet. Ulemper: Kan være mindre vanlig brukt enn GFP under visse eksperimentelle betingelser.
4. Fyrfly Luciferase : Fordeler: I tilstedeværelse av ATP, magnesiumioner og oksygen, kan det katalysere oksidasjonen av luciferin til oksyluciferin, med utslipp av bioluminsens. Det er egnet til å brukes som en kontroll for å studere oversettelseseffektiviteten av målgener i pattedyrsceller, cellelevealder og in vivo bildeanalyser.

Konklusjon

Når man velger hvilken metode for reporter mRNA-modifikasjoner som foretrekkes, avhenger det av spesifikke eksperimentelle mål, forskningsbakgrunner og eksperimentelle betingelser. For eksempel, hvis høy følsomhet kreves, kan eGFP være en bedre valg. Hvis bildeoptak på lengre bølgelengder trengs for å redusere bakgrunnsstøy, kan røde fluoresente proteiner som mCherry være mer egnet. Dessuten, basert på de spesifikke modifiseringsbehovene for mRNA (f.eks., forsterking av stabilitet, forbedring av oversettelseseffektivitet), kan den tilsvarende modifiseringsmetoden velges.

Som den første og største mikrobiologiske biologiske CRDMO i Større Kina tilbyr Yaohai Bio-Pharma fullført end-to-end skreddersydd løsninger eller enkelte tjenester som omfatter alt fra RNA-syntese, strekking av genetisk materiale og konstruksjon, utvikling av oppstrøms- og nedstrømsprosess, til GMP eller ikke-GMP nivå stoffprodusentmanufacturering, og fyll-og-slutttjenester for ulike modaliteter, såsom mRNA, circRNA, plasmid RNA, rekombinante proteiner, peptider, enzym, single domene antistoffer og VLPer for både menneskelig og veterinær bruk.

Yaohai Bio-Pharma søker også aktivt globale partnere, både institusjonelle og enkeltpersoner, og tilbyr den mest konkurransedyktige kompensasjonen i bransjen. Hvis du har noen spørsmål, hesitate ikke å kontakte oss: [email protected]