Championing Reporter RNA modifikasjonsmetoder

Når du velger hvilken metode for reporter-mRNA-modifikasjoner som er å foretrekke, er det ikke noe definitivt svar da hver metode og reportergen har sine egne fordeler og aktuelle scenarier. Her er noen vanlige mRNA-modifikasjonsmetoder og reportergener, sammen med deres egenskaper og egnethet.

mRNA-modifikasjonsmetoder

Metylering:

1. m6A: Assosiert med mRNA-stabilitet, spleising, translasjon og miRNA-behandling. Deteksjonsutfordringer inkluderer antistoffseleksjon og lokalisering.
2. 5' Cap Nm: Forbedrer stabilitet, skjøting, polyadenylering og kjernefysisk eksport. Hjelper med å skille selv-RNA fra fremmed RNA.
3. Pseudouridylering: Endrer kodoner, forbedrer stabiliteten og reagerer på stress. Katalysert av pseudouridinsyntaser.

Introduksjoner av ikke-naturlige nukleotider:

1. Introdusert under transkripsjon med en dobbel kjemisk modifikasjonsstrategi. Det forbedrer stabilitet, effektivitet og proteinuttrykk.

Reporter Genes

1. Grønt fluorescerende proteingen (GFP): Fordeler: Lett å oppdage, stabile fluorescensegenskaper, ikke-giftig for celler, egnet for levende celleavbildning. Ulemper: Begrenset fluorescensintensitet.
2. Forbedret grønt fluorescerende protein (eGFP): Fordeler: Over 6 ganger lysere enn villtype GFP, noe som gjør det mer egnet som et reportergen for å studere genuttrykk, regulering, celledifferensiering og proteinlokalisering og transport i organismer.
3. Røde fluorescerende proteiner (f.eks. mCherry): Fordeler: Lengre eksitasjons- og emisjonsbølgelengder, noe som resulterer i lavere bakgrunn under intracellulær avbildning, utmerket fluorescenslysstyrke og fotostabilitet, og lavere cellulær toksisitet. Ulemper: Kan ikke være like vanlig brukt som GFP under visse eksperimentelle forhold.
4. Firefly Luciferase: Fordeler: I nærvær av ATP, magnesiumioner og oksygen kan det katalysere oksidasjonen av luciferin til oksyluciferin, og avgir bioluminescens. Den er egnet for bruk som en kontroll for å studere translasjonseffektiviteten til målgener i pattedyrceller, cellelevedyktighet og in vivo avbildningsanalyser.

Konklusjon

Når du velger hvilken metode for reporter-mRNA-modifikasjoner som er å foretrekke, avhenger det av spesifikke eksperimentelle mål, forskningsbakgrunn og eksperimentelle forhold. Hvis for eksempel høy følsomhet kreves, kan eGFP være et bedre valg. Hvis avbildning ved lengre bølgelengder er nødvendig for å redusere bakgrunnsinterferens, kan røde fluorescerende proteiner som mCherry være mer egnet. I tillegg, basert på de spesifikke modifikasjonsbehovene til mRNA (f.eks. forbedre stabiliteten, forbedre translasjonseffektiviteten), kan den tilsvarende modifikasjonsmetoden velges.

Som den første og største mikrobielle biologiske CRDMO i Stor-Kina, tilbyr Yaohai Bio-Pharma ende-til-ende skreddersydde løsninger eller frittstående tjenester som spenner fra RNA-syntese, strain engineering og konstruksjon, oppstrøms og nedstrøms prosessutvikling, til GMP eller ikke -Produksjon av legemiddelstoff på GMP-nivå, og fyll- og etterbehandlingstjenester for ulike modaliteter, som mRNA, circRNA, plasmid-RNA, rekombinante proteiner, peptider, enzymer, enkeltdomene antistoffer og VLP-er for human og veterinær bruk.

Yaohai Bio-Pharma søker også aktivt etter institusjonelle eller individuelle globale partnere og tilbyr den mest konkurransedyktige kompensasjonen i bransjen. Hvis du har spørsmål, kan du gjerne kontakte oss: [email protected]