mRNA-integriteit
De betekenis van mRNA-integriteitsanalyse
mRNA's staan bekend om hun inherente instabiliteit en zijn gevoelig voor fragmentatie in de aanwezigheid van externe factoren, vooral tijdens in vitro transcriptie (IVT) en zuiveringsprocessen, waarbij alomtegenwoordige nucleasen een uitdaging vormen. Het evalueren van de mRNA-integriteit is cruciaal bij de daaropvolgende ontwikkeling van op mRNA gebaseerde geneesmiddelen, waarbij zowel de veiligheid als de productbeschikbaarheid worden gegarandeerd.
Yaohai-BioPharma biedt uitgebreide mRNA-integriteitstestdiensten, waarbij gebruik wordt gemaakt van methoden zoals agarosegelelektroforese (AGE), capillaire elektroforese (CEG) en krachtige vloeistofchromatografie (HPLC), waarbij strenge kwaliteitsnormen worden nageleefd voor zowel onderzoek als klinische onderzoeken.
Regelgevende vereisten voor mRNA-integriteit
Volgens de regelgevingsoverwegingen van de WHO wordt “de integriteit van de structuur van het mRNA beschouwd als een cruciaal kwaliteitsattribuut voor de vrijgave van het mRNA. Er is dus controle nodig op mRNA-integriteit, percentage intact mRNA, percentage mRNA-fragmenten enzovoort.”
Analytische methode
Analyse |
Methoden |
mRNA-integriteit |
AGE, Agarosegel elektroforese |
CGE,Capillaire elektroforese |
CGE-LIF, capillaire gelelektroforese met lichtgeïnduceerde fluorescentiedetectie |
mRNA-integriteit door agarosegelelektroforese
Agarosegelelektroforese is een veelgebruikte techniek voor het evalueren van de integriteit van totaal RNA. Dit omvat het uitvoeren van het RNA-monster op een denaturerende agarosegel, gekleurd met ethidiumbromide of SYBR Green. De denaturerende gel, samengesteld uit agarose, vergemakkelijkt de scheiding van RNA op basis van grootte wanneer een elektrische stroom wordt toegepast. Terwijl het negatief geladen RNA naar het positieve uiteinde van de gel migreert, bewegen kleinere fragmenten sneller, wat resulteert in een op grootte gebaseerde sortering van RNA-moleculen.
mRNA-integriteit door capillaire gelelektroforese
Capillaire gelelektroforese (CGE) is een analytische benadering met hoge resolutie die cruciaal is voor het meten van de integriteit van RNA-moleculen op basis van lengte. Deze beoordeling is van belang voor de kwaliteitsborging, het begrip van de potentie en de optimalisatie van productieprocessen. Net als bij agarosegelelektroforese gebruikt CGE een elektrische stroom om RNA-fragmenten te scheiden op basis van hun lading en grootte. Bij CGE wordt een capillair gevuld met een scheidingsgelmatrix doordrenkt met een fluorescerende kleurstof. De beweging van RNA langs het capillair is afhankelijk van de grootte ervan, en detectie wordt bereikt met behulp van ultraviolette (UV) of door licht geïnduceerde fluorescentie (LIF) detectoren.
EN
