LNP-lipidesamenstelling Identificeren en kwantiteit
De betekenis van LNP-lipidensamenstellingsanalyse
Lipidenanodeeltjes (LNP's), bestaande uit kationische lipiden, cholesterol, fosfolipiden en PEG-conjugaatlipiden, dienen als prominente afleversystemen voor mRNA-medicijnproducten. De stabiliteit en dubbellaagse vloeibaarheid van LNP's zijn afhankelijk van de eigenschappen en inhoud van de verschillende lipiden die in het formuleringssysteem worden gebruikt. De samenstelling van de lipiden is erg belangrijk voor hoe goed LNP's medicijnen afleveren.
Yaohai-BioPharma biedt oplossingen voor het identificeren en kwantificeren van de mRNA-LNP-lipidesamenstelling met behulp van de krachtige vloeistofchromatografie met geladen aerosoldetectie (HPLC-CAD) -methode.
Regelgevende vereisten voor lipidensamenstelling
Volgens de regelgevingsoverwegingen van de WHO moet “de uiteindelijke samenstelling van het vaccin, inclusief de lipiden, worden beschreven samen met de hoeveelheid componenten in elke presentatie.”
Analytische methode
Analyse | Methoden |
Lipidensamenstelling | HPLC gecombineerd met Corona Charged Aerosol Detector (CAD) |
Procedure
Stap 1. Voorbereiding van lipidemonsters
De keuze van het verdunningsmiddel is van het grootste belang voor de analyse van lipidecomponenten in mRNA-LNP-geneesmiddelen. Het verdunningsmiddel zou elke lipidecomponent effectief moeten oplossen en eventuele interacties tussen lipiden en ingekapseld mRNA moeten verstoren. Potentiële verdunningsmiddelen omvatten ethanol, ethanol/dimethylsulfoxide (DMSO), ethanol/formamide, ethanol/triethylamineacetaat en andere.
Stap 2. HPLC-CAD
Omgekeerde fase vloeistofchromatografie (RP-HPLC) gecombineerd met een geladen aerosoldetector (CAD) is opgenomen in het testen van de LNP-lipidesamenstelling. Gegeven dat lipiden geen chromoforen hebben en geen ultraviolette (UV) straling absorberen zonder derivatisering, is vervluchtiging doorgaans een uitdaging. Omdat CAD gevoeliger is, kan het een breder spectrum aan lipidengehalten onderscheiden. Eerder werd een ultrahoge prestatie vloeistofchromatografie (UHPLC) gekoppeld aan een geladen aerosoldetector (CAD) -methode geformuleerd en toegepast in lipidenanalyse voor kleine interfererende RNA (siRNA) LNP-onderzoeken.
Stap 3. Data-analyse
De hoeveelheid van elk lipide in het monster omvatte berekeningen afgeleid van de standaardcurve vermenigvuldigd met de verdunningsfactor. Dit proces leverde het lipidegehalte op voor elk bestanddeel in het mRNA-LNP-monster.
Geval van LNP-lipidesamenstellingsanalyse met HPLC-CAD
Op basis van HPLC-CAD heeft Yaohai-BioPharma een robuuste methode ontwikkeld voor de analyse van lipidecomponenten van mRNA-LNP. Deze methode werd gevalideerd om lineair, herhaalbaar, nauwkeurig, accuraat en specifiek te zijn voor LNP-formuleringen, die procesontwikkeling, formuleringsontwikkeling, stabiliteitstests en mRNA-LNP-afgifte zouden kunnen ondersteunen.
Chromatografisch profiel van 4 lipiden volgens Yaohai-BioPharma's HPLC-CAD-methode
De lineariteit van Yaohai-BioPharma's HPLC-CAD-methode (R2>0.99)
EN
