재조합 인간 인슐린 정제 공정 최적화

최근 몇 년 동안 당뇨병 환자의 증가로 인슐린 수요가 증가했지만 저렴한 인슐린은 부족합니다. 효율적이고 경제적인 인슐린 생산이 중요합니다. 주로 대장균(E. coli)과 효모를 통해 생산되며, 빠른 성장과 낮은 비용으로 인해 대장균은 복잡한 하류 처리에 직면합니다.

다운스트림 처리 개요:

대장균 봉입체로부터 재조합 인간 인슐린을 정제하는 데는 회수, 세척, 가용화 및 산화, 절단, 완충액 교환, 크로마토그래피 정제, 침전, 재생, 효소 절단 및 제형화를 포함한 여러 단계가 포함됩니다.

Yaohai Bio-Pharma는 재조합 인슐린 생산 및 정제 분야에서 광범위한 경험을 자랑하며, 전문가 팀과 함께 인슐린 생산이 높은 효율성으로 완료되도록 보장합니다. 수백 개의 프로젝트에서 얻은 경험을 활용하여 Yaohai는 재조합 인간 인슐린의 다운스트림 정제 프로세스를 최적화하는 방법을 친절하게 요약합니다.

포함체 회수 및 세척:

세포는 기계적 방법(초음파, 고압 균질화 등) 또는 리소자임 처리를 사용하여 파괴한 다음, 세척 완충액(요소, 트리톤 X-100 등 포함)을 사용하여 불순물을 제거합니다. 세척하는 동안 매개변수를 최적화하여 비용을 제어하면서 단백질 품질을 보장해야 합니다.

포괄체 용해 및 산화:

고농도 변성제(구아니딘 염산염 및 요소 등)를 사용하여 봉입체를 용해하고, 디티오트레이톨 또는 β-머캅토에탄올을 첨가하여 잘못된 이황화물 결합이 형성되는 것을 방지합니다. pH와 온도는 용해 및 산화 반응에 상당한 영향을 미칩니다.

분열 및 완충액 교환:

시안 브롬화물 절단은 N-말단 개시 아미노산을 제거하는 데 사용되지만 독성과 낮은 특이성 문제가 있습니다. 투석, 초여과 또는 크기 배제 크로마토그래피를 통해 완충액 교환은 후속 작업을 준비하기 위해 유해한 시약을 제거합니다.

크로마토그래피 정제 및 침전:

인슐린을 정제하기 위해 친화성 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피를 포함한 여러 크로마토그래피 기술이 사용됩니다. pH 침전 및 아연 결정화와 같은 침전 방법은 불순물을 제거하고 단백질을 농축하는 데 사용됩니다.

재생성:

용해된 단백질은 재생 완충액에 희석되어 이황화물 결합과 단백질 접힘의 올바른 형성을 촉진합니다. 단백질 접힘 액체 크로마토그래피와 투석도 재생에 사용되는 방법입니다.

효소적 절단 및 제형:

트립신과 카르복시펩티다아제 B는 C-펩타이드를 절단하여 활성 인슐린 이종이량체를 형성하는 데 사용됩니다. 마지막으로 결정화 및 동결건조를 사용하여 잔류 염과 완충액을 제거하여 안정한 제형을 제조합니다. 특정 첨가제(예: 아연 및 프로타민)를 추가하여 다양한 임상적 요구를 충족합니다.

결론 :

인슐린의 하류 처리 E. 대장균 복잡합니다. 향후 초점은 수요를 충족하고 비용을 절감하기 위해 효율적이고 경제적인 생산을 위해 이러한 단계를 최적화하는 데 맞춰야 합니다.

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