재조합 인간 인슐린 정제 과정 최적화

최근 몇 년간 당뇨병 환자의 증가로 인슐린 수요가 급증하고 있지만, 저렴한 인슐린의 공급은 여전히 부족한 상태입니다. 효율적이고 경제적인 인슐린 생산은 매우 중요합니다. 주로 빠른 성장과 낮은 비용 때문에 대장균(Escherichia coli, E. coli)과 효모를 통해 생산되지만, E. coli는 복잡한 후속 처리 과정을 필요로 합니다.

후속 처리 개요:

E. coli 포함체에서 재조합 인간 인슐린을 정제하기 위해서는 회수, 세척, 용해 및 산화, 절단, 버퍼 교환, 크로마토그래피에 의한 정제, 침전, 재구성, 효소 절단 및 제형화 등 여러 단계가 필요합니다.

야오하이 바이오-파마는 재조합 인슐린 생산 및 정제 분야에서 풍부한 경험을 보유하고 있으며, 전문가 팀을 통해 귀사의 인슐린 생산을 고효율로 완료할 수 있도록 지원합니다. 수백 건의 프로젝트 경험을 바탕으로, 야오하이는 재조합 인간 인슐린의 후속 정제 과정을 최적화하는 방법을 요약하여 제공합니다.

포함체 회수 및 세척:

세포는 기계적 방법(초음파, 고압 균질화 등) 또는 리소지메 처리를 통해 파괴되며, 이후 세척 버퍼(우레아, 트리톤 X-100 등 포함)가 사용되어 불순물을 제거합니다. 세척 중에는 단백질 품질을 유지하면서 비용을 통제하기 위해 매개변수를 최적화해야 합니다.

포함체 용해 및 산화:

고농도 전개제(구아니딘 수산화물 및 우레아 등)가 포함체를 용해하는 데 사용되며, 부정확한 이황화 결합 형성을 방지하기 위해 디티트로일 또는 β-메르카포에탄올이 첨가됩니다. pH와 온도는 용해 및 산화 반응에 큰 영향을 미칩니다.

분리 및 버퍼 교환:

시아노겐 브로마이드 절단은 N-말기 시작 아미노산을 제거하는 데 사용되지만, 독성과 낮은 특이성 문제를 초래한다. 다이알리시스, 초여과 또는 크기 배제 크로마토그래피를 통해 버퍼 교환은 후속 작업을 위해 유해한 재агент을 제거한다.

크로마토그래피 정제 및 침전:

다양한 크로마토그래피 기술들이 인슐린을 정제하는 데 사용되며, 이는 친화성 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피 및 크기 배제 크로마토그래피를 포함한다. pH 침전 및 아연 결정화와 같은 침전 방법들은 불순물을 제거하고 단백질을 농축하는 데 사용된다.

재구조화:

용해된 단백질은 적절한 이황화 결합 형성과 단백질 접힘을 촉진하기 위해 재구조화 버퍼에서 희석된다. 단백질 접힘 액체 크로마토그래피와 다이알리시스도 재구조화에 사용되는 방법들이다.

효소 절단 및 조제:

트립신과 카복시펩티다제 B는 C-펩타이드를 절단하여 활성 인슐린 이종이량체를 형성하는 데 사용됩니다. 마지막으로, 잔여 염류와 버퍼를 제거하기 위해結晶화 및 동결건조가 이루어져 안정적인 제형을 준비합니다. 특정 첨가제(예: 아연, 프로타민)는 다양한 임상적 요구를 충족시키기 위해 추가됩니다.

결론:

인슐린의 후속 처리 과정은 대장균 매우 복잡합니다. 향후 초점은 수요를 충족하고 비용을 줄이기 위해 이러한 단계를 최적화하여 효율적이고 경제적인 생산을 달성하는 것입니다.

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