eGFP mRNA 제조 공정

eGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA의 생산에는 eGFP의 발현을 인코딩하는 기능적 RNA 분자를 생성하기 위한 일련의 분자 생물학 기술이 포함됩니다. eGFP mRNA 분야에서 Yaohai Bio-Pharma는 고객의 특정 요구 사항을 충족하는 데 있어 광범위한 경험을 축적했습니다. 당사의 경험을 활용하여 EGFP mRNA를 생산하기 위한 프로세스 흐름을 종합했습니다.

1. eGFP 유전자 복제: eGFP를 인코딩하는 유전자 서열을 얻는 것입니다. 이 유전자는 일반적으로 기존 플라스미드 벡터에서 복제되거나 알려진 뉴클레오티드 서열을 기반으로 인공적으로 합성됩니다. 복제된 유전자는 정확성을 보장하기 위해 시퀀싱을 통해 검증됩니다.
2. 발현을 위한 유전자 최적화: 표적 시스템(예: 포유류 세포, 박테리아 또는 시험관 내 전사 시스템)에서 최적의 발현을 위해 eGFP 유전자는 코돈 최적화를 거칠 수 있습니다. 여기에는 원래 시퀀스의 희귀 코돈을 숙주 생물에서 더 자주 사용되는 코돈으로 대체하여 효율적인 번역 가능성을 높이는 것이 포함됩니다.
3. 체외 필사 템플릿 준비: 최적화된 유전자가 준비되면, 전사에 필요한 조절 요소(예: 프로모터 시퀀스)를 포함하는 적절한 벡터(종종 플라스미드)에 통합됩니다. 이 플라스미드는 시험관 내 전사를 위한 템플릿 역할을 합니다.
4. 체외 전사: 준비된 플라스미드 템플릿을 사용하여 시험관 내 전사를 수행하여 eGFP mRNA를 합성합니다. 이 과정에는 프로모터 서열을 인식하고 전사를 개시하여 DNA 템플릿에 대한 보완 RNA 가닥을 생성하는 RNA 중합효소를 사용합니다. 원하는 응용 분야에 따라 mRNA를 캡핑, 폴리아데닐화 및/또는 수정하여 안정성과 번역 효율성을 높일 수 있습니다.
5. 정화 및 품질 관리: 합성된 eGFP mRNA는 DNA, 단백질, 자유 뉴클레오티드를 포함한 모든 오염 물질을 제거하기 위해 정제됩니다. 정제 방법에는 겔 전기영동, 컬럼 크로마토그래피 또는 비드 기반 분리가 포함될 수 있습니다. 정제 후 mRNA는 UV-Vis 분광 광도법 및 겔 전기영동과 같은 기술을 사용하여 농도, 순도 및 무결성을 포함한 품질에 대해 분석됩니다.
6. 보관 및 배송: 정제된 eGFP mRNA는 일반적으로 안정성을 유지하기 위해 저온에서 보관됩니다. 실험적 용도로 mRNA는 특정 응용 분야와 표적 세포 유형에 따라 전기 천공, 리포펙션 또는 바이러스 벡터를 포함한 다양한 방법을 사용하여 세포로 전달될 수 있습니다.
7. 표현과 검증: 세포 내부로 들어가면 eGFP mRNA는 향상된 녹색 형광 단백질로 번역되고, 이는 형광 현미경을 사용하여 시각화할 수 있습니다. 이를 통해 성공적인 mRNA 생산, 전달 및 발현을 검증할 수 있습니다.

요약하면, eGFP mRNA 생산은 유전자 복제, 발현을 위한 최적화, 시험관 내 전사 템플릿 제조, 전사 반응 수행, 생성된 mRNA 정제, 마지막으로 발현 및 검증을 위해 세포에 전달하는 과정을 포함합니다.

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