EGFP mRNA 제조 공정

강화 녹색 형광 단백질(eGFP) mRNA의 생산은 기능적인 RNA 분자를 생성하기 위한 일련의 분자 생물학 기술을 포함하며, 이 RNA 분자는 eGFP 발현을 위해 필요합니다. Yaohai Bio-Pharma는 고객의 특정 요구 사항에 맞추기 위해 eGFP mRNA 분야에서 풍부한 경험을 쌓았습니다. 우리의 경험을 바탕으로 우리는 EGFP mRNA를 생산하는 공정 흐름을 종합했습니다.

1. EGFP 유전자 클로닝 : eGFP를 인코딩하는 유전자 서열을 얻기 위해 이 유전자는 일반적으로 기존 플라스미드 벡터에서 클로닝되거나 알려진 염기 서열에 기초하여 인공적으로 합성됩니다. 클로닝된 유전자는 정확성을 보장하기 위해 시퀀싱을 통해 검증됩니다.
2. 발현을 위한 유전자 최적화 : 대상 시스템(예: 포유류 세포, 박테리아 또는 체외 전사 시스템)에서 최적의 발현을 위해 eGFP 유전자는 코돈 최적화를 거칠 수 있습니다. 이는 원래 서열의 희귀 코돈을 호주 생체에서 더 자주 사용하는 코돈으로 교체하여 효율적인 번역의 가능성을 높이는 과정입니다.
3. 체외에서 전사 템플릿 준비 : 최적화된 유전자가 준비되면, 종종 프로모터 서열과 같은 전사에 필요한 규제 요소를 포함하는 적절한 벡터(일반적으로 플라스미드)에 삽입됩니다. 이 플라스미드는 체외 전사의 템플릿으로 사용됩니다.
4. 체외에서 전사 : 준비된 플라스미드 템플릿을 사용하여 체외 전사가 수행되어 eGFP mRNA가 합성됩니다. 이 과정은 프로모터 시퀀스를 인식하고 전사를 시작하는 RNA 폴리머라제 효소의 사용을 포함하며, DNA 템플릿에 보완적인 RNA 스트랜드를 생성합니다. 원하는 응용 분야에 따라 mRNA는 안정성을 높이고 번역 효율을 개선하기 위해 캡핑, 폴리아데닐화 및/또는 변형될 수 있습니다.
5. 정제 및 품질 관리 : 합성된 eGFP mRNA는 DNA, 단백질, 자유 뉴클레오타이드와 같은 오염 물질을 제거하기 위해 정제됩니다. 정제 방법에는 겔 전기영동, 칼럼 크로마토그래피 또는 비드 기반 분리가 포함될 수 있습니다. 정제 후, UV-Vis 분광광도계 및 겔 전기영동과 같은 기술을 사용하여 mRNA의 품질(농도, 순도 및 무결성)이 분석됩니다.
6. 저장 및 전달 : 순화된 eGFP mRNA는 일반적으로 안정성을 유지하기 위해 낮은 온도에서 저장됩니다. 실험적 용도로는 전기 투입, 지질체 전달(lipofection), 또는 바이러스 벡터 등의 다양한 방법을 사용하여 세포에 mRNA를 전달할 수 있으며, 이는 특정 응용 분야와 대상 세포 유형에 따라 다릅니다.
7. 발현 및 검증 : 세포 내부로 들어가면 eGFP mRNA는 엔한스드 그린 플루오레센트 프로테인으로 번역되며, 이를 형광 현미경을 사용하여 시각화할 수 있습니다. 이는 성공적인 mRNA 생산, 전달 및 발현을 확인하는 데 사용됩니다.

요약하면, eGFP mRNA의 생산은 유전자 클로닝, 발현을 위한 최적화, in vitro 전사 템플릿 준비, 전사 반응 수행, 생성된 mRNA의 정제, 그리고 마지막으로 세포에 전달하여 발현 및 검증하는 과정을 포함합니다.

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