Avaa korkealaatuisen plasmidiuuton salaisuudet

Plasmidin uuttaminen on ratkaisevan tärkeää tutkijoille. Geenivektoreina plasmidit ovat elintärkeitä rokotetutkimuksessa ja geeniterapiassa, missä laatu ratkaisee. Keskeisiä laatutekijöitä ovat supercoiled osuus ja endotoksiinipitoisuus. Säännöt vaihtelevat: FDA ≥ 80 %, SMPA ≥ 85 %, NMPA ≥ 90 %, < 5 % lineaarinen/avoin ympyrä DNA. Asiakkaat suosivat usein ≥95 % supercoiled. Endotoksiinitasot ovat: tutkimus (>50 EU/µg), transfektio (<50 EU/µg) ja endotoksiinivapaa (<0.1 EU/µg).

Superkierteinen plasmidi-DNA

Escherichia colin plasmideja ovat superkierteinen (SC), avoin ympyrä (OC) ja lineaarinen (L) DNA. Korkea SC-osuus lisää transfektion tehokkuutta ja ilmentymistä. Esimerkiksi 85.45 %:n SC-plasmidin transfektio on 2.5 kertaa suurempi ja 93.28 %:n SC-plasmidin HGF-ilmentyminen on 1.8 kertaa suurempi, mikä vahvistaa SC-DNA:n paremmuuden.

Avoin pyöreä DNA: Kun yksi kaksijuosteisen DNA:n juoste katkeaa, superkierteinen rakenne löystyy muodostaen avoimen pyöreän plasmidin, jolla on suurempi tilavuus ja joka kulkee hitain elektroforeesin aikana ja sijoittuu huipulle.

Lineaarinen DNA: Kun plasmidi-DNA:n molemmat säikeet katkeavat, muodostuu lineaarinen rakenne, jonka tilavuus on suhteellisesti pienempi ja joka kulkee nopeammin kuin avoimen ympyrän DNA, mutta hitaammin kuin superkierteinen DNA, sijoittuen toiseksi.

Superkierteinen DNA: Kaksi kierrettä kietoutuvat toisiinsa kiertyen DNA-kierteeseen perustuvaksi superkierteiseksi rakenteeksi. Sen tilavuus on pienin ja se liikkuu nopeimmin elektroforeesin aikana, sijoitettuna pohjaan.

Supercoiled Proportionin kvantitatiivinen analyysi

Laboratoriot käyttävät agaroosigeelielektroforeesia (AGE) ja Gel-Pro Analyzeria superkierteisen osuuden arvioimiseen elektroforeesikuvien avulla. Yhdessä kuvassa on 97.539 % SC DNA:ta, kun taas toisessa 63.833 % SC:tä ja 36.167 % OC-DNA:ta (lineaarinen DNA ei näy).

Endotoksiinin salaisuus plasmideissa

Endotoksiini on gramnegatiivisten bakteerien soluseinän ulkokerroksen komponentti, joka vapautuu bakteerien kuoleman tai hajoamisen jälkeen ja joka sisältää myrkyllistä lipopolysakkaridi A:ta. Plasmidiuuton aikana endotoksiini pääsee lyysiliuokseen, mikä vaikuttaa transfektion tehokkuuteen ja laukaisee epäspesifisiä immuunivasteita, mikä johtaa vääriin positiivisiin tuloksiin kokeissa.

Endotoksiinin kvantitatiivinen ja kvalitatiivinen analyysi

Limulus amebocyte lysate (LAL) -testi havaitsee endotoksiinin agglutinaation avulla 2-keto-3-deoksioktonihapolla (KDO) lipopolysakkaridissa (LPS). Se on kvalitatiivinen ja puolikvantitatiivinen, mikä osoittaa endotoksiinin esiintymisen koagulaation tai värin muutoksen kautta, kun se sekoitetaan näytteisiin.

Yaohai Bio-Pharma tarjoaa endotoksiinittomia superkierteisiä plasmideja. Ulkoistaminen Yaohaille parantaa transfektio- ja ilmentymistehokkuutta. Toimitettujen plasmidien SC-osuus on ≥95 % (keskimäärin 85 %±10 %) ja endotoksiinitasot ≤0.1, ≤0.01 tai ≤0.005 EU/μg.

Etsimme myös aktiivisesti institutionaalisia tai yksittäisiä globaaleja kumppaneita. Tarjoamme alan kilpailukykyisimmän palkkauksen. Jos sinulla on kysyttävää, ota rohkeasti yhteyttä: [email protected]