Avaten korkealaatuisen plasmidiextraktion salaisuudet

Plasmidin eristäminen on elintärkeää tutkijoille. Geenivektoreina plasmidit ovat olennaisia rooleissa rokote- ja geeniterapian tutkimuksessa, missä laatu on avainasemia. Tärkeimmät laadun tekijät sisältävät superpikoidun osuuden ja endotoxini-sisällön. Säädökset vaihtelevat: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, <5% lineaarista/avointa ympyränmuotoista DNA:a. Asiakkaat suosivat usein ≥95% superpikokoa. Endotoxini-tasot ovat: tutkimus (>50 EU/µg), transfektio (<50 EU/µg) ja endotoxini-vapaaksi todistettu (<0.1 EU/µg).

Superpikokoinen Plasmidi-DNA

Escherichia colista peräisin olevat plasmidit sisältävät superpikokoidun (SC), avointa ympyränmuotoista (OC) ja lineaarista (L) DNA:a. Korkea SC-osuus parantaa transfektion tehokkuutta ja ilmaantumista. Esimerkiksi 85,45%:n SC-plasmidin transfektio on 2,5 kertaa korkeampi, ja 93,28%:n SC-plasmidin HGF-ilmaantuminen on 1,8 kertaa korkeampi, mikä vahvistaa SC-DNA:n ylivoimaisuuden.

Avoin-ympyräinen DNA: Kun toinen kahdenkertainen DNA:n ketju katkeaa, ylikiertymäinen rakenne hajoaa, muodostaen avoimen ympyräisen plasmidiin, joka on suurempi ja siirtyy hitaammin elektroforeesissa, sijaitseva yläpuolella.

Suorainen DNA: Kun molemmat plasmidin DNA:n ketjut katkeavat, muodostuu suorainen rakenne, jonka tilavuus on suhteellisesti pienempi kuin avoimella ympyräisellä DNA:lla, mutta se siirtyy hitaammin kuin ylikiertymäinen DNA, sijaitseva toisena.

Ylikiertymäinen DNA: Kaksi helikset liittyvät keskenään, muodostaen ylikiertymäisen rakenteen perustuen DNA-helikseen. Sen tilavuus on pienin, ja se siirtyy nopeimmin elektroforeesissa, sijaitseva alapuolella.

Määrällinen analyysi ylikiertymäisen osuudesta

Tutkimuslaboratoriot käyttävät agarosegeeli-elektroforeesia (AGE) ja Gel-Pro Analyzer -ohjelmaa arvioimaan ylikiertymäisen osuutta elektroforeesikuville perustuen. Yksi kuvasta näyttää 97,539 % SC DNA:ta, kun taas toinen näyttää 63,833 % SC DNA:ta ja 36,167 % OC DNA:ta (suoraa DNA:tä ei näy).

Plasmideissa olevien lopotoxineiden salaisuus

Endotoxini on osa Gram-negatiivisten bakteerien soluseinän ulkoista kerrosta, jota vapautuu bakteerien kuoleman tai lietoon jälkeen, ja se sisältää myrkyllistä lipopolysakkaridia A. Plasmidin poisto-prosessissa endotoxini pääsee lietoratkaisuun, mikä vaikuttaa transfektioon tehokkuuteen ja aiheuttaa epäspesifisiä keuhkokeiluvastauksia, johtuen kokeiden vääriin positiivisiin tuloksiin.

Määrällinen ja laadullinen analyysi endotoxineista

Limulus-amebocyttiliuosatesti (LAL-testi) havaitsee endotoxineita agglutinaation kautta 2-keto-3-deoksyoktanoihmolla (KDO), joka löytyy lipopolysakkaridiasta (LPS). Se on laadullinen ja puolimäärällinen, ilmaisen endotoxineiden läsnäolon hyytenemisen tai värimuutoksen avulla, kun se sekoitetaan näytteiden kanssa.

Yaohai Bio-Pharma tarjoaa endotoxini-ilman yliripuloituja plasmidoita. Ulkopuolisen palveluntarjoajan käyttö parantaa transfektio- ja esitystehosta. Toimitetut plasmidit sisältävät ≥95% YR-osuutta (keskim. 85%±10%) ja endotoxini-pitoisuudet ovat ≤0.1, ≤0.01 tai ≤0.005 EU/μg.

Hakemme myös aktiivisesti globaaleja kumppaneita instituutioilta tai yksilöiltä. Tarjoamme alan kilpailukykyisimmät palkkiot. Jos sinulla on kysymyksiä, ota meihin yhteyttä ilman epäröintiä: [email protected]