eGFP mRNA:n valmistusprosessi

eGFP:n (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA:n tuotanto sisältää joukon molekyylibiologian tekniikoita eGFP:n ilmentymistä koodaavan funktionaalisen RNA-molekyylin luomiseksi. eGFP mRNA:n alueella Yaohai Bio-Pharmalla on laaja kokemus asiakkaiden erityistarpeiden palvelemisesta. Hyödyntämällä kokemustamme olemme syntetisoineet prosessivirran EGFP-mRNA:n tuottamiseksi.

1. eGFP-geenin kloonaus: Se hankkii eGFP:tä koodaavan geenisekvenssin. Tämä geeni kloonataan tyypillisesti jo olemassa olevasta plasmidivektorista tai syntetisoidaan keinotekoisesti tunnetun nukleotidisekvenssin perusteella. Kloonattu geeni varmistetaan sitten sekvensoinnilla tarkkuuden varmistamiseksi.
2. Geenioptimointi ilmentymistä varten: Optimaalista ilmentymistä varten kohdejärjestelmässä (esim. nisäkässolut, bakteerit tai in vitro -transkriptiojärjestelmät) eGFP-geenille voidaan tehdä kodonioptimointi. Tämä sisältää alkuperäisen sekvenssin harvinaisten kodonien korvaamisen isäntäorganismissa useammin käytetyillä kodoneilla, mikä lisää tehokkaan translaation mahdollisuuksia.
3. In vitro Transkriptiomallin valmistelu: Kun optimoitu geeni on valmis, se liitetään sopivaan vektoriin, usein plasmidiin, joka sisältää transkriptioon tarvittavia säätelyelementtejä (esim. promoottorisekvenssi). Tämä plasmidi toimii templaattina in vitro -transkriptiolle.
4. In vitro Transcription: In vitro -transkriptio suoritetaan käyttämällä valmistettua plasmiditemplaattia eGFP-mRNA:n syntetisoimiseksi. Tässä prosessissa käytetään RNA-polymeraasientsyymejä, jotka tunnistavat promoottorisekvenssin ja käynnistävät transkription, tuottaen komplementaarisen RNA-juosteen DNA-templaattiin. Halutusta sovelluksesta riippuen mRNA voidaan peittää, polyadenyloida ja/tai modifioida stabiilisuuden ja translaatiotehokkuuden parantamiseksi.
5. Puhdistus ja laadunvalvonta: Syntetisoitu eGFP-mRNA puhdistetaan sitten epäpuhtauksien poistamiseksi, mukaan lukien DNA, proteiinit ja vapaat nukleotidit. Puhdistusmenetelmiä voivat olla geelielektroforeesi, pylväskromatografia tai helmipohjainen erotus. Puhdistuksen jälkeen mRNA:n laatu analysoidaan, mukaan lukien pitoisuus, puhtaus ja eheys, käyttämällä tekniikoita, kuten UV-Vis-spektrofotometriaa ja geelielektroforeesia.
6. Varastointi ja toimitus: Puhdistettua eGFP-mRNA:ta säilytetään tyypillisesti matalissa lämpötiloissa stabiilisuuden säilyttämiseksi. Kokeellista käyttöä varten mRNA voidaan kuljettaa soluihin käyttämällä erilaisia ​​menetelmiä, mukaan lukien elektroporaatio, lipofektio tai virusvektorit spesifisen sovelluksen ja kohdesolutyypin mukaan.
7. Ilmaisu ja vahvistus: Kun eGFP-mRNA on solun sisällä, se transloituu parannelluksi vihreäksi fluoresoivaksi proteiiniksi, joka voidaan visualisoida käyttämällä fluoresenssimikroskopiaa. Tämä mahdollistaa onnistuneen mRNA:n tuotannon, toimituksen ja ilmentymisen todentamisen.

Yhteenvetona voidaan todeta, että eGFP-mRNA:n tuotanto sisältää geenin kloonauksen, sen optimoinnin ekspressiota varten, in vitro -transkriptiotemplaatin valmistuksen, transkriptioreaktion suorittamisen, tuloksena olevan mRNA:n puhdistamisen ja lopuksi sen toimittamisen soluihin ilmentämistä ja varmentamista varten.

Etsimme myös aktiivisesti institutionaalisia tai yksittäisiä globaaleja kumppaneita. Tarjoamme alan kilpailukykyisimmän palkkauksen. Jos sinulla on kysyttävää, ota rohkeasti yhteyttä: [email protected]