EGFP-mRNA:n valmistusprosessi

EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA:n tuotanto sisältää joukon molekyylibiologisia tekniikoita, joilla luodaan toimiva RNA-molekyyli, joka koodaa eGFP:n ilmaisuun. eGFP mRNA:sta liittyvissä tehtävissä Yaohai Bio-Pharma on kerännyt laajaa kokemusta vastaakseen asiakkaiden erityistarpeisiin. Hyödyntämällä kokemustamme olemme yhdistäneet prosessijärjestelmän eGFP mRNA:n tuottamiseksi.

1. EGFP-geenin kloonaus : Sen saavuttamiseksi tarvitaan geneensekvenssi, joka koodaa eGFP:lle. Tämä geeni kloonataan yleensä aiemmin olemassa olevasta plasmidivektorista tai syntetisoidaan tekoisesti tunnetun nukleotiideisekvenssin perusteella. Kloonattu geeni vahvistetaan sitten sekvenssoinnin avulla varmistaakseen tarkkuuden.
2. Geenin optimointi ilmaisuun : Optimaalista ilmaantumista kohtejärjestelmässä (esim. sammasoluissa, bakteereissa tai in vitro -transkriptiojärjestelmissä) varten eGFP-geeni voi alustaa koodonsuodattamisen. Tämä sisältää harvinaisten koodonien korvaamisen alkuperäisessä järjestyksessä useammin käytetyillä isännöijärjestelmän omilla, lisäämällä todennäköisyyttä tehokkaasta käännöksiin.
3. In vitro Transkriptiotemplaatin valmistus : Kun optimoitu geeni on valmis, se integroidaan sopivaan vektoriin, usein plasmidiin, joka sisältää transkriptioon tarpeelliset sääntelyelementit (esim. promotorisekvenssi). Tämä plasmidi toimii mallina in vitro -transkriptiolle.
4. In vitro Transkriptio : Valmistetun plasmidiin temppelin avulla suoritetaan in vitro -transkriptio synteesoidaksesi eGFP-mRNA:ta. Tämä prosessi sisältää RNA-polymeraasi-enzymien käytön, jotka tunnistavat promotorisekvenssin ja aloittavat transkription, tuottamalla komplementaarisen RNA-suoran DNA-temppeliin nähden. Riippuen halutusta soveltamisalasta, mRNA voi olla peitetty, polyadyloitu ja/tai muokattu parantaakseen vakautta ja käännösmenetelmän tehokkuutta.
5. Puhdistus ja laadunvalvonta : Syntetisoitu eGFP-mRNA puhdistetaan poistaakseen kaikki saasteet, mukaan lukien DNA, proteiinit ja vapauduttuneet nukleotidit. Puhdistusmenetelmiin voi kuulua geleelektroforeesi, sarjakuormitus tai pilvipohjaista erottelua. Puhdistuksen jälkeen mRNA-analysoidaan laadun varmistamiseksi, mukaan lukien keskitys, puhtaus ja kokonaisuus, käyttämällä tekniikoita, kuten UV-Vis-spektrofotometriaa ja geleelektroforeesia.
6. Tallennus ja toimitus : Puhdistettu eGFP-mRNA tallennetaan yleensä matalilla lämpötiloilla säilyttääkseen vakauden. Kokeelliseen käyttöön mRNA:tä voidaan toimittaa soluihin useilla menetelmillä, mukaan lukien elektroporaatio, liposektio tai virusten vektorit, riippuen sovelluksen ja kohdesolujen tyypin mukaan.
7. Lisääntymisen ja varmistuksen ilmaisu : Kun se on solun sisällä, eGFP-mRNA käännetään lisääntymiseen vihreäksi fluoresoivaksi proteeksi, jota voidaan havaita fluoresoivalla mikroskopilla. Tämä mahdollistaa menestyneen mRNA:n tuotannon, toimittamisen ja ilmaisun varmistamisen.

Yhteenvetona voidaan todeta, että eGFP-mRNA:n tuotanto koostuu geenin kloonaamisesta, sen optimoinnista ilmaisulle, in vitro-transkriptio-temppelin valmistamisesta, transkriptioreaktion suorittamisesta, tuloksena saadun mRNA:n puhdistamisesta ja lopulta sen toimittamisesta soluihin ilmaisun ja varmistuksen tarkoitukseen.

Hakemme myös aktiivisesti globaaleja kumppaneita instituutioilta tai yksilöiltä. Tarjoamme alan kilpailukykyisimmät palkkiot. Jos sinulla on kysymyksiä, ota meihin yhteyttä ilman epäröintiä: [email protected]