Championing Reporter RNA:n modifiointimenetelmät

Kun valitaan, mikä menetelmä reportteri-mRNA-modifikaatioille on parempi, ei ole lopullista vastausta, koska jokaisella menetelmällä ja reportterigeenillä on omat etunsa ja soveltuvat skenaariot. Tässä on joitain yleisiä mRNA-muokkausmenetelmiä ja reportterigeenejä sekä niiden ominaisuuksia ja sopivuutta.

mRNA:n modifiointimenetelmät

Metylointi:

1. m6A: Liittyy mRNA:n stabiilisuuteen, silmukointiin, translaatioon ja miRNA-prosessointiin. Havaitsemishaasteisiin kuuluu vasta-aineen valinta ja lokalisointi.
2. 5' Cap Nm: Parantaa vakautta, silmukointia, polyadenylaatiota ja ydinaineiden vientiä. Auttaa erottamaan oman RNA:n vieraasta RNA:sta.
3. Pseudouridylaatio: Muuttaa kodoneja, parantaa vakautta ja reagoi stressiin. Pseudouridiinisyntaasien katalysoima.

Ei-luonnollisten nukleotidien esittely:

1. Otettu käyttöön transkription aikana kaksoiskemiallisella modifikaatiostrategialla. Se parantaa vakautta, tehokkuutta ja proteiinien ilmentymistä.

Reportteri Genes

1. Green Fluorescent Protein Gene (GFP): Edut: Helppo havaita, vakaat fluoresenssiominaisuudet, myrkytön soluille, sopii elävien solujen kuvantamiseen. Haitat: Rajoitettu fluoresenssin intensiteetti.
2. Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP): Edut: Yli 6 kertaa kirkkaampi kuin villityypin GFP, joten se sopii paremmin reportterigeeniksi geenin ilmentymisen, säätelyn, solujen erilaistumisen ja proteiinien lokalisoinnin ja kuljetuksen tutkimiseen organismien sisällä.
3. Punaiset fluoresoivat proteiinit (esim. mCherry): Edut: Pidemmät viritys- ja emissioaallonpituudet, mikä johtaa alhaisempaan taustaan ​​solunsisäisen kuvantamisen aikana, erinomaiseen fluoresenssin kirkkauteen ja fotostabiilisuuteen sekä alhaisempaan solumyrkyllisyyteen. Haitat: Ei ehkä yhtä yleisesti käytetty kuin GFP tietyissä koeolosuhteissa.
4. Firefly lusiferaasi: Edut: ATP:n, magnesium-ionien ja hapen läsnä ollessa se voi katalysoida lusiferiinin hapettumista oksilusiferiiniksi, joka lähettää bioluminesenssia. Se soveltuu käytettäväksi kontrollina tutkittaessa kohdegeenien translaatiotehokkuutta nisäkässoluissa, solujen elinkelpoisuutta ja in vivo -kuvausmäärityksiä.

Yhteenveto

Kun valitaan, mikä menetelmä reportteri-mRNA-modifikaatioille on parempi, se riippuu erityisistä kokeellisista tavoitteista, tutkimustaustoista ja koeolosuhteista. Jos esimerkiksi vaaditaan suurta herkkyyttä, eGFP voi olla parempi valinta. Jos tarvitaan kuvantamista pitemmillä aallonpituuksilla taustahäiriöiden vähentämiseksi, punaiset fluoresoivat proteiinit, kuten mCherry, voivat olla sopivampia. Lisäksi mRNA:n spesifisten modifiointitarpeiden perusteella (esim. stabiilisuuden lisääminen, translaatiotehokkuuden parantaminen) voidaan valita vastaava modifikaatiomenetelmä.

Ensimmäisenä ja suurimmana mikrobibiologisten CRDMO-yhtiönä Suur-Kiinassa Yaohai Bio-Pharma tarjoaa kokonaisvaltaisia ​​räätälöityjä ratkaisuja tai itsenäisiä palveluita RNA-synteesistä, kantojen suunnittelusta ja rakentamisesta, alku- ja loppupään prosessikehityksestä GMP:hen tai muuhun. -GMP-tason lääkeaineiden valmistus sekä täyttö- ja viimeistelypalvelut erilaisille modaliteeteille, kuten mRNA, sircRNA, plasmidi-RNA, rekombinantti proteiinit, peptidit, entsyymit, yksidomeeniset vasta-aineet ja VLP:t ihmisten ja eläinten käyttöön.

Yaohai Bio-Pharma etsii myös aktiivisesti institutionaalisia tai yksittäisiä globaaleja kumppaneita ja tarjoaa alan kilpailukykyisimmän palkkion. Jos sinulla on kysyttävää, ota rohkeasti yhteyttä: [email protected]