Esimerkkejä Reporter RNA -muunnosmeneteleistä

Kun valitaan, mikä raportoijan mRNA-muokkausmenetelmistä on suosittava, ei ole yksiselitteistä vastausta, koska jokaisella menetelmällä ja raportoijagenilla on omat edut ja soveltuvat skenaariot. Tässä on joitain yleisiä mRNA-muokkausmenetelmiä ja raportoijageneja sekä niiden ominaisuuksia ja soveltuvuutta.

mRNA-muokkausmenetelmät

Metyleeritys:

1. m6A : Liitetty mRNA:n vakmuuteen, spesiointiin, kääntämiseen ja miRNA-käsittelyyn. Havaitsemisen haasteita ovat抗体valinta ja paikannus.
2. 5' Kapssi Nm : Parantaa vakmuutta, spesiointia, polyadenylointia ja ydintoimitusta. Auttaa erottamaan itse-RNA:ta vierasta RNA:ta.
3. Pseudouridylyys : Muuttaa koodaajia, parantaa vakmuutta ja reagoi stressiin. Katalyytöidään pseudouridyliisyntaaseilla.

Ettelyjä ei luonnollisista nukleotideista:

1. Lisätty transkription aikana kaksinkertaisen kemiallisen muunnoksen strategiassa. Se parantaa stabiilisuutta, tehokkuutta ja proteiinien ilmaisua.

Ilmoitteen geenit

1. Vihreä fluoresoivinen proteiinin gene (GFP) : Edut: Helppo havaita, vakaa fluoresenssiominaisuudet, ei ole soluille myrkyllistä, sopii elävien solujen kuvaamiseen. Haitat: Rajoitettu fluoresenssinsiitevyys.
2. Parannettu vihreä fluoresoivinen proteiini (eGFP) : Edut: Yli kuusi kertaa kirkas verrattuna luonteenomaiseen GFP:hen, mikä tekee siitä sopivampaa ilmoitteen geenina tutkimiseen geneespression, -säännöllisyyden, solun differenssointia sekä proteiinien paikannusta ja kuljetusta organismien sisällä.
3. Punainen fluoresoiviset proteiinit (esim. mCherry) : Edut: Pitemmät herättämisyhteydet ja -päästöt, mikä johtaa vähempään taustaan intrasellulaarisessa kuvaamisessa, erinomainen fluoresenssin kirkkaus ja valostabiilisuus sekä vähämpi solullinen myrkyllisyys. Haitat: Saattavat olla vähemmän yleisiä tietyissä kokeellisissa olosuhteissa kuin GFP.
4. Tulppakarhuksen luciferase : Edut: ATP:n, magneesiioniiden ja hapon läsnäolossa se voi katalysoida luciferiinin oksidoinnin oxyluciferiiniksi, jota seuraa biolumineskeeraus. Sitä voidaan käyttää tarkoituksenmukaisesti tarkastellessa kohdegenejen käännösefektiivisuutta, solun elinkelpoisuutta sekä in vivo-kuvauksessa.

Johtopäätös

Kun päätetään, mikä raporttijan mRNA-muokkausten menetelmistä on suosittava, se riippuu konkreettisista kokeellisista tavoitteista, tutkimustyypeistä ja kokeellisista olosuhteista. Esimerkiksi, jos tarvitaan korkea herkkyyden taso, eGFP saattaa olla parempi valinta. Jos kuvataan pidemmällä aallotoimialueella vähentääkseen taustahäiriöt, punaisia fluoresoivia proteiineja, kuten mCherry:tä, saattaa olla sopivampi. Lisäksi, riippuen konkreettisista mRNA:ta koskevista muokkaustarpeista (esim. vakauden parantaminen tai käännösefektiivisuuden parantaminen), voidaan valita vastaava muokkausmenetelmä.

Kuin ensimmäinen ja suurin mikrobiologisten biologiatekijöiden CRDMO Suurella Kiinalla, Yaohai Bio-Pharma tarjoaa loppuunsaannon mukautettuja kokonaisratkaisuja tai erillispalveluita, jotka ulottuvat RNA:n synteesista, käyttökiekon muokkaamisesta ja rakentamisesta, ylävirta- ja alavirta-prosessien kehittämisestä aina GMP- tai ei-GMP-tason aktiivisten aineiden valmistukseen sekä täyttö- ja lopputuotannopalveluihin monipuolisille tiloille, kuten mRNA:lle, circRNA:lle, plasmid-RNA:lle, rekombinoituille proteiineille, pepteideille, enzyymeille, yksinkertaisille alue-antikeinoille ja VLP:ille ihmisten ja eläinten käytölle.

Yaohai Bio-Pharma etsii myös aktiivisesti maailmanlaajuja instituutionaalisia tai yksilöllisiä kumppaneita ja tarjoaa kilpailukykyimpien palkkioita teollisuudessa. Jos sinulla on kysymyksiä, ota meihin iloisin yhteyttä: [email protected]