دائروی آر این اے (circRNAs) کو نام عددی آر این اے کے طور پر 1979 میں پہلی بار دریافت کیا گیا؛ یہ نہیں تک 2015 تک تحریری circRNAs Drosophila میں پائے گئے جن کے باعث معالجاتی اور پیشگیرانہ مقاصد کے لئے in vitro circRNAs کی تحقیق شروع ہوئی۔
circRNAs خود گستاخ ہوتے ہیں اور لہذا ان کے پاس عام structure جیسے 5' cap یا 3' polyA tail نہیں ہوتی ہے۔ یہ structure انہیں زیادہ مستحکم اور RNase R جیسے exonucleases کے خلاف متاثر نہیں ہونے والے بناتی ہے۔
دائروی آر این اے (circRNA) کے ساختی عناصر
سरکیو آر این اے (circRNA) کی تخلیق کے لئے ٹیمپلیٹ ڈی این اے معمولًا اندری رائبوسوم داخلی موقع (IRES)، اوپن ریڈنگ فریم (ORF) اور دیگر ضروری عناصر شامل ہوتا ہے، جو درجاتی حلقے کے لئے حیاتی ہوتے ہیں۔ مثلاً، ہم نے ایک پلاسمڈ ڈیزائن کیا جو ایک in vitro transcript (IVT) ٹیمپلیٹ کے طور پر استعمال ہوتا ہے، جس میں homology arms، 3' intron، 3' exon، IRES، ORF، 5' exon اور 5' intron شامل ہیں، تاکہ سرکیو آر این اے کو خود شدید طریقے سے تیار کیا جا سکے۔
اندری رائبوسوم داخلی موقع (IRES) سرکیو آر این اے (cirRNAs) کے ترجمانی عمل میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ Encephalomyocarditis وائرس (EMCV) IRES، coxsackievirus B3 (CVB3) IRES، human rhinovirus B3 (HRV-B3) IRES اور دیگر IRES عام طور پر in vitro synthesis کے لئے ترجمانی کے لئے استعمال کیے جاتے ہیں۔
حیاتی دائری RNA خطی پیشہ سازوں کے درمیان تبدیل ہونا، circRNA تخلیق میں ایک اہم قدم ہے، عام طور پر کیمیائی، انزایمی اور رائبوسوم مدیر خود تکثیر کے ذریعے۔ اس شعبے میں ایک میلستون کے طور پر جانا جاتا ہے، کیمیائی رویہ circRNA تولید کے لیے، جو 1988 میں شروع ہوا، آج نہیں استعمال ہوتا کیونکہ اس کے زیادہ خرچ، کم فیصلہ، زیادہ عددی جانبی مصنوعات، اور واقعی یہ بات کہ یہ صرف 70 نیوکلیوٹائیڈز کی لمبائی تک دائری RNAs کے لیے مناسب ہے۔
RNA کو دائروی بنانے کے لیے انزایمی طریقوں کی بنیاد T4 باکٹیریوفیج انزایمز یا رائبوزمز جیسے T4 DNA لگیز (T4 Dnl 1)، T4 RNA لگیز 1 (T4 Rnl 1) اور T4 RNA لگیز 2 (T4 Rnl 2) پر ہے۔ T4 باکٹیریوفیج انزایم کے ذریعے دائروی RNA بنانے کے لیے، نیوکلیوسائیڈ مونوفاسفیٹس کو RNA کے 5' انتھے اور 3' انتھے پر OH گروپ کے ساتھ جڑا کیا جانا چاہئے۔ کیونکہ نیوکلیوسائیڈ ٹری فاسفیٹس واکنش کے دوران شامل ہوتے ہیں، IVT RNA کے 5' انتھے پر گوانوسائن ٹری فاسفیٹ (GTP) موجود ہوتا ہے۔
ریبوzymes RNA کے تسلسلات ہیں جو خود سپلائیسنگ کو بڑھاوا دیتے ہیں، لینیئر RNA مolecules کو circRNA میں تبدیل کرتے ہیں اور اضافی انزایم کی ضرورت نہیں ہوتی ہے۔ خود جمع کرنے والے پروسیس میں دو متواتر transesterification ریکشن specific sites پر ہوتے ہیں تاکہ مراد کے circRNA پrouducts بنائیں جاسکیں۔ گروپ I intron خود سپلائیسنگ طریقہ جو PIE (intron اور exon encapsulation) کے نام سے بھی جانا جاتا ہے، جس کے ذریعہ 5 kb سے لمبے circRNAs کی تیاری ممکن ہوتی ہے، وسیع طور پر مطالعہ کیا گیا ہے اور اس کا استعمال مفید ثابت ہوا ہے۔
دائروی RNA (circRNA) کا استعمال
CircRNA ویکسنز
خطی mRNAs کی طرح، circRNAs کو لکھائی ہوئی خلیات میں کچھ پروٹینز میں تبدیل کیا جا سکتا ہے اور وہ مضبوط مائعی اور خلوی免疫 کو حوصلہ دیتا ہے۔ اخیر میں، کچھ تحقیقی گروپ نے کامیابی سے COVID-19 کو روکنے کے لیے circRNA واکسائن تیار کیے ہیں۔ ان کے نتائج نے نہ صرف خطی mRNA واکسائن کے فائدے حاصل کیے بلکہ انہوں نے خطی mRNA سے بہتر ثبات اور پروٹین عبارت کی لمبی مدت کو بھی ظاہر کیا۔ لہذا، circRNA واکسائن کم دوزوں پر بھی مناسب Immunological ردعمل تولید کر سکتے ہیں۔
اس کے علاوہ، کچھ ماہرین کا خیال ہے کہ circRNA واکسائن، اگلی پیشی کے mRNAs کے طور پر، مستقبل میں عام وائرسی/بیکٹیریل بیماریوں اور اہم نئی عفونیاتی بیماریوں کے خلاف م奏یل ادوات بن سکتے ہیں، اور کینسر اور دیگر بیماریوں کے علاج کے لیے بھی استعمال کیے جا سکتے ہیں۔
CircRNA کار تیZR-T علاج میں
گول RNA کے شعبے میں پہلی طرف، ORNA نے in situ chimeric antigen receptor (CAR) تھراپی کی ترقی کا عمل شروع کر دیا ہے، جو ORN-101 کے ساتھ استعمال کرتی ہے، ایک LNP-encapsulated گول RNA، جس کا مقصد بیماروں میں immune cells کو modulate کرنا ہے۔ ORN-101 میں CAR کی high expression optimized IRES element کے ذریعہ چلتی ہے۔ Animal models میں، ORN-101 کو tumor suppression اور destruction کرنے کے لئے ظاہر کیا گیا، جو اس بات کی رائے دیتی ہے کہ ORN-101-based anticancer therapies conventional CAR-T cell therapy سے متداخل ہوسکتی ہے۔
اس کے علاوہ، Zhang اور ان کے ساتھیوں نے circRNAs کی viability اور therapeutic efficacy کو antigen-specific T-cell receptor (TCR)-T therapies میں قدر کیا۔ وہ نے pp65-TCR-T ڈزائن کیا، جو cytomegalovirus (CMV) کے pp65 epitope کو target کرتا ہے۔ علاوہ ازیں، pp65-TCR کو primary T cells پر over 7 days تک expressed کرنے کا مظاہرہ کیا گیا۔ علاوہ ازیں، circRNA-pp65-TCR-T cells خاص طور پر اور منظم طور پر pp65- اور HLA-expressing tumor cells کو مارنے میں کامیاب رہیں اور مaus کی survival time کو معنوی طور پر بڑھایا۔
یہ بھی ظاہر ہوا کہ pp65 circRNA سے ٹرانس فیکٹڈ سلز مقارنے میں linear mRNA کے مقابلے میں بہتر ایمیون ریپانز دکھاتی ہیں۔
یاؤہائی کا Bio-Pharma One-Stop CRDMO حل لمبے کوڈنگ RNA کے لئے
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
