سرکلر RNAs (circRNAs) سب سے پہلے 1979 میں نان کوڈنگ RNAs کے طور پر دریافت ہوئے تھے۔ یہ 2015 تک نہیں تھا کہ ڈروسوفلا میں نقل شدہ سرک آر این اے پائے گئے تھے، جس کی وجہ سے علاج اور حفاظتی مقاصد کے لیے ان وٹرو سرک آر این اے کا مطالعہ کیا گیا۔
circRNAs خود پھیلتے ہیں اور اس لیے ان کی روایتی ساخت نہیں ہوتی ہے جیسے کہ 5' کیپ یا 3' پولی اے ٹیل۔ یہ ڈھانچہ انہیں RNase R جیسے exonucleases کے لیے زیادہ مستحکم اور مزاحم بناتا ہے۔
سرکلر آر این اے (سرکلر آر این اے) کے ساختی عناصر
circRNA ترکیب کے لیے ٹیمپلیٹ DNA میں عام طور پر اندرونی رائبوزوم انٹری سائٹ (IRES)، اوپن ریڈنگ فریم (ORF)، اور دیگر شامل ہوتے ہیں جو وٹرو گردش کے لیے اہم ہوتے ہیں۔ مثال کے طور پر، ہم نے وٹرو ٹرانسکرپٹ (IVT) ٹیمپلیٹ کے طور پر ایک پلازمڈ ڈیزائن کیا، جس میں ہومولوجی آرمز، 3' انٹرن، 3' ایکسون، IRES، ORF، 5' exon، اور 5' انٹرن شامل ہیں، تاکہ خود کو الگ کرکے سرک آر این اے تیار کیا جا سکے۔ طریقے
انٹرنل رائبوزوم انٹری سائٹ (IRES) cirRNAs کے ترجمے میں اہم کردار ادا کرتی ہے۔ Encephalomyocarditis وائرس (EMCV) IRES، coxsackievirus B3 (CVB3) IRES، انسانی rhinovirus B3 (HRV-B3) IRES اور دیگر IRES کو عام طور پر cirRNAs کے وٹرو ترکیب کے ترجمہ کے لیے استعمال کیا گیا ہے۔
Vivo میں circRNA لکیری پیشگیوں کی سائیکلائزیشن circRNA کی ترکیب میں ایک اہم قدم فراہم کرتی ہے، عام طور پر کیمیکل، انزیمیٹک، اور رائبوزوم ثالثی خود نقل کے راستوں کے ذریعے۔ میدان میں ایک سنگ میل کے طور پر جانا جاتا ہے، 1988 میں شروع ہونے والی سرک این اے کی پیداوار کے لیے کیمیائی نقطہ نظر، اب اس کی زیادہ قیمت، کم پیداوار، زیادہ تعداد میں ضمنی مصنوعات، اور یہ حقیقت ہے کہ یہ صرف سائیکل چلانے کے لیے موزوں ہے، اب استعمال نہیں کیا جاتا۔ RNAs لمبائی میں 70 نیوکلیوٹائڈس تک۔
RNA کو سائیکل کرنے کے انزیمیٹک طریقے بیکٹیریوفیج T4 انزائمز یا رائبوزائمز جیسے T4 DNA ligase (T4 Dnl 1) T4 RNA ligase 1 (T4 Rnl 1) اور T4 RNA ligase 2 (T4 Rnl 2) پر مبنی ہیں۔ T4 بیکٹیریوفیج انزائمز کے ذریعے سرکلر آر این اے بنانے کے لیے، نیوکلیوسائیڈ مونو فاسفیٹس کو 5' سرے پر واقع ہونا چاہیے اور RNA کے 3' سرے پر OH گروپ سے جوڑنا چاہیے۔ چونکہ رد عمل کے دوران نیوکلیوسائیڈ ٹرائی فاسفیٹ شامل کیے جاتے ہیں، IVT RNA میں 5' کے آخر میں guanosine triphosphate (GTP) ہوتا ہے۔
رائبوزائمز آر این اے کی ترتیب ہیں جو اضافی خامروں کی ضرورت کے بغیر لکیری آر این اے مالیکیولز کو سر آر این اے میں تبدیل کرکے خود کو الگ کرنے کو فروغ دیتے ہیں۔ خود اسمبلی کے عمل میں مخصوص سائٹس پر لگاتار دو ٹرانسسٹریفیکیشن ری ایکشنز شامل ہوتے ہیں تاکہ یہ یقینی بنایا جا سکے کہ مطلوبہ سر آر این اے پروڈکٹس بن چکے ہیں۔ گروپ I انٹرن سیلف سپلائینگ طریقہ، جسے PIE (انٹرون اور ایکسون انکیپسولیشن) بھی کہا جاتا ہے، جو 5 kb سے زیادہ طویل cirRNAs کی پیداوار کی اجازت دیتا ہے، کا بڑے پیمانے پر مطالعہ کیا گیا ہے اور یہ مفید ثابت ہوا ہے۔
سرکلر آر این اے (سرکلر آر این اے) کا اطلاق
سرک آر این اے ویکسینز
لکیری mRNAs کی طرح، circRNAs کو ٹارگٹ سیلز میں مخصوص پروٹینز میں تبدیل کیا جا سکتا ہے اور مضبوط مزاحیہ اور سیلولر قوت مدافعت پیدا کر سکتے ہیں۔ حال ہی میں، کچھ تحقیقی ٹیمیں ہیں جنہوں نے COVID-19 کو روکنے کے لیے کامیابی سے سرک این اے ویکسین تیار کیں۔ ان کے نتائج نے نہ صرف لکیری mRNA ویکسین کے فوائد حاصل کیے ہیں بلکہ لکیری mRNA کے مقابلے میں پروٹین کے اظہار کی بہتر استحکام اور طویل مدت پر فخر بھی کیا ہے۔ لہذا، circRNA ویکسین کم خوراکوں پر بھی مناسب مدافعتی ردعمل پیدا کر سکتی ہیں۔
اس کے علاوہ، کچھ محققین کا خیال ہے کہ circRNA ویکسین، اگلی نسل کے mRNAs کے طور پر، مستقبل میں عام وائرل/بیکٹیریائی بیماریوں اور ابھرتی ہوئی بڑی متعدی بیماریوں کے ساتھ ساتھ کینسر اور دیگر بیماریوں کے علاج کے لیے موثر ہتھیار بن سکتی ہیں۔
CAR/TCR-T تھراپی میں CircRNA
سرکلر آر این اے کے میدان میں ایک علمبردار کے طور پر، ORNA سیٹو chimeric antigen ریسیپٹر (CAR) تھیراپی میں ترقی کر رہا ہے جو کہ ORN-101، LNP- encapsulated سرکلر RNA کے ساتھ مریضوں میں مدافعتی خلیوں کو ماڈیول کرنے کے لیے استعمال کرتا ہے۔ ORN-101 ایک بہترین IRES عنصر کے ذریعہ کارفرما کار کا اعلی اظہار پیش کرتا ہے۔ جانوروں کے ماڈلز میں، ORN-101 کو ٹیومر کو دبانے اور تباہی کو دلانے کے لیے دکھایا گیا تھا، جس سے یہ تجویز کیا گیا تھا کہ ORN-101 پر مبنی اینٹی کینسر علاج روایتی CAR-T سیل تھراپی میں مداخلت کر سکتے ہیں۔
اس کے علاوہ، Zhang et al. اینٹیجن مخصوص ٹی سیل ریسیپٹر (TCR) -T علاج میں circRNAs کی عملداری اور علاج کی افادیت کا جائزہ لیا۔ انہوں نے cytomegalovirus (CMV) کے pp65 ایپیٹوپ کو نشانہ بناتے ہوئے ایک سرک آر این اے انکوڈنگ pp65-TCR-T ڈیزائن کیا۔ اس کے علاوہ، pp65-TCR کو پرائمری ٹی سیلز پر 7 دنوں سے زیادہ ظاہر کیا جاتا ہے۔ اس کے علاوہ، circRNA-pp65-TCR-T خلیات نے خاص طور پر اور مستقل طور پر pp65- اور HLA ظاہر کرنے والے ٹیومر خلیوں کو ہلاک کیا اور چوہوں کی بقا کے وقت کو نمایاں طور پر بڑھا دیا۔
یہ بھی دکھایا گیا کہ pp65 circRNA سے منتقلی والے خلیات لکیری mRNA کے مقابلے بہتر مدافعتی ردعمل ظاہر کرتے ہیں۔
طویل کوڈنگ RNA کے لیے Yaohai کا بائیو فارما ون اسٹاپ CRDMO حل
UR
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
نہیں
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
BN
