Целостность мРНК
Значение анализа целостности мРНК
мРНК известны своей присущей им нестабильностью и подвержены фрагментации в присутствии внешних факторов, особенно во время транскрипции in vitro (IVT) и процессов очистки, где вездесущие нуклеазы представляют собой проблему. Оценка целостности мРНК имеет решающее значение для последующей разработки лекарств на основе мРНК, обеспечивая как безопасность, так и доступность продукта.
Yaohai-BioPharma предоставляет комплексные услуги по тестированию целостности мРНК, используя такие методы, как электрофорез в агарозном геле (AGE), капиллярный электрофорез (CEG) и высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), придерживаясь строгих стандартов качества как для научных исследований, так и для клинических испытаний.
Нормативные требования к целостности мРНК
Согласно нормативным соображениям ВОЗ, «целостность структуры мРНК считается критическим показателем качества высвобождения мРНК. Таким образом, необходим контроль целостности мРНК, процента интактной мРНК, процента фрагментов мРНК и так далее».
Аналитический метод
Анализ |
методы |
целостность мРНК |
AGE, агарозаgэлектрофорез |
КГЭ,Капиллярный электрофорез |
CGE-LIF, Капиллярный гель-электрофорез со светоиндуцированной флуоресценцией. |
Целостность мРНК по данным электрофореза в агарозном геле
Электрофорез в агарозном геле — широко используемый метод оценки целостности тотальной РНК. Это включает в себя обработку образца РНК на денатурирующем агарозном геле, окрашенном либо бромистым этидием, либо SYBR Green. Денатурирующий гель, состоящий из агарозы, облегчает разделение РНК по размеру при приложении электрического тока. По мере того как отрицательно заряженная РНК мигрирует к положительному концу геля, более мелкие фрагменты движутся быстрее, что приводит к сортировке молекул РНК по размеру.
Целостность мРНК по данным капиллярного гель-электрофореза
Капиллярный гель-электрофорез (CGE) представляет собой аналитический подход с высоким разрешением, имеющий решающее значение для оценки целостности молекул РНК по длине. Эта оценка имеет значение для обеспечения качества, понимания эффективности и оптимизации производственных процессов. Подобно электрофорезу в агарозном геле, CGE использует электрический ток для разделения фрагментов РНК в зависимости от их заряда и размера. При CGE капилляр заполняется матрицей разделительного геля, пропитанной флуоресцентным красителем. Движение РНК вдоль капилляра зависит от ее размера, и обнаружение достигается с помощью детекторов ультрафиолетового (УФ) или светоиндуцированной флуоресценции (LIF).
EN
