Липидный состав ЛНП, определение и количество
Значение анализа липидного состава ЛНП
Липидные наночастицы (ЛНЧ), включающие катионные липиды, холестерин, фосфолипиды и липиды, конъюгированные с ПЭГ, служат важными системами доставки лекарственных препаратов на основе мРНК. Стабильность и двухслойная текучесть ЛНЧ зависят от свойств и содержания различных липидов, используемых в рецептурной системе. Состав липидов очень важен для того, насколько хорошо ЛНЧ доставляют лекарства.
Yaohai-BioPharma предлагает решения для идентификации и количественного определения липидного состава мРНК-ЛНЧ с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с обнаружением заряженного аэрозоля (ВЭЖХ-САПР).
Нормативные требования к липидному составу
Согласно нормативным требованиям ВОЗ, «окончательный состав вакцины, включая липиды, должен быть описан вместе с количеством компонентов в каждой форме».
Аналитический метод
Анализ |
методы |
Липидный состав |
ВЭЖХ в сочетании с детектором аэрозолей, заряженных коронным разрядом (CAD) |
Процедура
Шаг 1. Подготовка проб липидов
Выбор разбавителя имеет первостепенное значение для анализа липидных компонентов лекарственных препаратов мРНК-ЛНЧ. Разбавитель должен эффективно растворять каждый липидный компонент и нарушать любые взаимодействия между липидами и инкапсулированной мРНК. Потенциальные разбавители включают этанол, этанол/диметилсульфоксид (ДМСО), этанол/формамид, этанол/триэтиламинацетат и другие.
Шаг 2. ВЭЖХ-CAD
Обращенно-фазовая жидкостная хроматография (ОФ-ВЭЖХ) в сочетании с детектором заряженных аэрозолей (CAD) была включена в тестирование липидного состава ЛНЧ. Учитывая, что липиды лишены хромофоров и не поглощают ультрафиолетовое (УФ) излучение без дериватизации, улетучивание обычно затруднено. CAD, будучи более чувствительным, может различать более широкий спектр содержания липидов. Ранее метод сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии (UHPLC) в сочетании с методом детектора заряженного аэрозоля (CAD) был разработан и применен при анализе липидов для исследований LNP малых интерферирующих РНК (siRNA).
Шаг 3. Анализ данных
Количество каждого липида в образце рассчитывалось исходя из стандартной кривой, умноженной на коэффициент разведения. Этот процесс позволил определить содержание липидов для каждого компонента образца мРНК-ЛНЧ.
Случай анализа липидного состава ЛНЧ с помощью ВЭЖХ-CAD
На основе HPLC-CAD компания Yaohai-BioPharma разработала надежный метод анализа липидных компонентов мРНК-LNP. Было подтверждено, что этот метод является линейным, воспроизводимым, точным, аккуратным и специфичным для составов LNP, что может способствовать разработке процессов, разработке составов, тестированию стабильности и высвобождению мРНК-LNP.
Хроматографический профиль 4 липидов методом HPLC-CAD компании Yaohai-BioPharma.
Линейность метода ВЭЖХ-САПР компании Yaohai-BioPharma (R2＞0.99)
EN
