Membaiki Proses Penyucian bagi Insulin Manusia Rekombinan

Dalam beberapa tahun terakhir, pertumbuhan pasien diabetes telah mendorong permintaan insulin, tetapi insulin yang terjangkau tersedia dalam jumlah terbatas. Produksi insulin yang efisien dan ekonomis sangat penting. Secara utama dihasilkan melalui Escherichia coli (E. coli) dan ragi karena pertumbuhan cepat dan biaya rendah, E. coli menghadapi pemrosesan hilir yang kompleks.

Gambaran Pemprosesan Hilir:

Mempurifikasi insulin manusia rekombinan dari badan inklusi E. coli melibatkan beberapa langkah, termasuk pemulihan, pencucian, peleburan dan oksidasi, pemotongan, pertukaran buffer, pemurnian kromatografi, pengendapan, renaturasi, pemotongan enzimatik, dan formulasi.

Yaohai Bio-Pharma memiliki pengalaman luas dalam produksi dan pemurnian insulin rekombinan, bersama dengan tim ahli, memastikan produksi insulin Anda diselesaikan dengan efisiensi tinggi. Dengan memanfaatkan pengalaman dari ratusan proyek, Yaohai dengan senang hati merangkum cara untuk mengoptimalkan Proses Pemurnian Hilir untuk Insulin Manusia Rekombinan.

Pemulihan dan Pencucian Badan Termasuk:

Sel-sel diputuskan menggunakan kaedah mekanikal (seperti ultrasonikasi, homogenisasi tekanan tinggi) atau rawatan lysozyme, diikuti oleh penyelesa pencuci (mengandungi urea, Triton X-100, dll.) untuk membuang kotoran. Semasa pencucian, parameter perlu dioptimumkan untuk memastikan kualiti protein sambil mengawal kos.

Penyelesaian dan Oksidasi Badan Termasuk:

Penyahbentuk berkepekatan tinggi (seperti guanidine hydrochloride dan urea) digunakan untuk melarutkan badan termasuk, dengan dithiothreitol atau β-mercaptoethanol ditambah untuk mengelakkan pembentukan ikatan disulfida yang salah. pH dan suhu secara signifikan mempengaruhi tindak balas penyelesaian dan oksidasi.

Pemotongan dan Tukar Penyelesa:

Pemisahan sianogen bromida digunakan untuk mengeluarkan asid amino pengarah N-terminal, tetapi ia menyebabkan masalah toksikiti dan kekurangan spesifik. Melalui dialisis, ultrafiltrasi, atau kromatografi pengecualian saiz, pertukaran perisa membuang bahan kimia berbahaya sebagai persediaan untuk operasi seterusnya.

Purifikasi Kromatografi dan Penjumudan:

Teknik kromatografi berganda digunakan untuk memurnikan insulin, termasuk kromatografi afiniti, kromatografi pertukaran ion, kromatografi fasa songsang, kromatografi interaksi hidrofobik, dan kromatografi pengecualian saiz. Kaedah penjumudan, seperti penjumudan pH dan penjelmaan zink, digunakan untuk mengeluarkan kotoran dan mengoncentratkan protein.

Renaturasi:

Protein yang dilarutkan diencerkan dalam perisa renaturasi untuk memupuk pembentukan yang betul dari ikatan disulfida dan lipatan protein. Kromatografi cecair pelipatan protein dan dialisis juga adalah kaedah yang digunakan untuk renaturasi.

Pemisahan Enzimatik dan Formula:

Trypsin dan carboxypeptidase B digunakan untuk memotong C-peptide, membentuk heterodimer insulin aktif. Akhirnya, pengristalan dan liofilisasi digunakan untuk mengeluarkan garam dan penyangga sisa, menyediakan formulasi yang stabil. Additif spesifik (seperti seng dan protamin) ditambahkan untuk memenuhi keperluan klinikal yang berbeza.

Kesimpulan:

Pemprosesan hulu insulin dari E. coli adalah kompleks. Fokus masa depan harus diletakkan pada penyempurnaan langkah-langkah ini untuk pengeluaran yang cekap dan ekonomi untuk memenuhi permintaan dan mengurangkan kos.

Yaohai Bio-Pharma juga aktif mencari rakan global, sama ada institusi atau perorangan, dan menawarkan ganti rugi paling kompetitif dalam industri. Jika anda mempunyai sebarang soalan, sila hubungi kami: BD@yaohaibio.cn