Mengoptimumkan Proses Pemurnian untuk Insulin Manusia Rekombinan

Dalam tahun-tahun kebelakangan ini, pertumbuhan pesakit diabetes telah mendorong permintaan insulin, tetapi insulin mampu milik adalah kurang bekalan. Pengeluaran insulin yang cekap dan menjimatkan adalah penting. Dihasilkan terutamanya melalui Escherichia coli (E. coli) dan yis kerana pertumbuhan pesat dan kos rendah, E. coli menghadapi pemprosesan hiliran yang kompleks.

Gambaran Keseluruhan Pemprosesan Hiliran:

Memurnikan insulin manusia rekombinan daripada badan kemasukan E. coli melibatkan pelbagai langkah, termasuk pemulihan, pencucian, pelarutan dan pengoksidaan, pembelahan, pertukaran penimbal, penulenan kromatografi, pemendakan, renaturasi, pembelahan enzimatik dan perumusan.

Yaohai Bio-Pharma menawarkan pengalaman yang luas dalam pengeluaran dan penulenan insulin rekombinan, ditambah dengan pasukan pakar, memastikan pengeluaran insulin anda dilengkapkan dengan kecekapan tinggi. Memanfaatkan pengalaman kami daripada beratus-ratus projek, Yaohai dengan hormatnya merumuskan cara mengoptimumkan Proses Pembersihan Hilir untuk Insulin Manusia Rekombinan.

Pemulihan dan Pencucian Badan Kemasukan:

Sel-sel terganggu menggunakan kaedah mekanikal (seperti ultrasonik, homogenisasi tekanan tinggi) atau rawatan lisozim, diikuti dengan penimbal pencuci (mengandungi urea, Triton X-100, dll.) untuk membuang kekotoran. Semasa mencuci, parameter perlu dioptimumkan untuk memastikan kualiti protein sambil mengawal kos.

Pelarutan dan Pengoksidaan Badan Kemasukan:

Denaturan berkepekatan tinggi (seperti guanidine hydrochloride dan urea) digunakan untuk melarutkan badan kemasukan, dengan dithiothreitol atau β-mercaptoethanol ditambah untuk mengelakkan pembentukan ikatan disulfida yang tidak betul. pH dan suhu memberi kesan ketara kepada tindak balas pelarutan dan pengoksidaan.

Belahan dan Pertukaran Penampan:

Pembelahan sianogen bromida digunakan untuk mengeluarkan asid amino permulaan terminal-N, tetapi ia menimbulkan isu ketoksikan dan kekhususan rendah. Melalui dialisis, ultraturasan atau kromatografi pengecualian saiz, Pertukaran Penampan membuang reagen berbahaya sebagai persediaan untuk operasi seterusnya.

Pemurnian dan Kerpasan Kromatografi:

Teknik kromatografi berbilang digunakan untuk menulenkan insulin, termasuk kromatografi pertalian, kromatografi pertukaran ion, kromatografi fasa terbalik, kromatografi interaksi hidrofobik dan kromatografi pengecualian saiz. Kaedah pemendakan, seperti pemendakan pH dan penghabluran zink, digunakan untuk membuang kekotoran dan menumpukan protein.

Pengubahsuaian:

Protein terlarut dicairkan dalam penimbal renaturasi untuk menggalakkan pembentukan ikatan disulfida dan lipatan protein yang betul. Kromatografi cecair lipatan protein dan dialisis juga merupakan kaedah yang digunakan untuk renaturasi.

Pembelahan Enzimatik dan Formulasi:

Trypsin dan carboxypeptidase B digunakan untuk membelah C-peptida, membentuk heterodimer insulin aktif. Akhir sekali, penghabluran dan liofilisasi digunakan untuk membuang sisa garam dan penimbal, menyediakan formulasi yang stabil. Bahan tambahan khusus (seperti zink dan protamin) ditambah untuk memenuhi keperluan klinikal yang berbeza.

Kesimpulan:

Pemprosesan hiliran insulin daripada E. coli adalah kompleks. Tumpuan masa depan harus diberikan kepada mengoptimumkan langkah-langkah ini untuk pengeluaran yang cekap, menjimatkan untuk memenuhi permintaan dan mengurangkan kos.

Yaohai Bio-Pharma juga sedang giat mencari rakan kongsi global institusi atau individu dan menawarkan pampasan paling kompetitif dalam industri. Jika anda mempunyai sebarang pertanyaan, sila hubungi kami: [email protected]