Proses Pengilangan mRNA eGFP Malaysia

Pengeluaran mRNA eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) melibatkan satu siri teknik biologi molekul untuk menjana molekul RNA berfungsi yang mengekod untuk ekspresi eGFP. Dalam bidang mRNA eGFP, Yaohai Bio-Pharma telah mengumpul pengalaman yang luas dalam memenuhi keperluan khusus pelanggan. Dengan memanfaatkan pengalaman kami, kami telah mensintesis aliran proses untuk menghasilkan mRNA EGFP.

1. Mengkloning Gen eGFP: Ia untuk mendapatkan pengekodan jujukan gen untuk eGFP. Gen ini biasanya diklon daripada vektor plasmid yang sedia ada atau disintesis secara buatan berdasarkan jujukan nukleotida yang diketahui. Gen yang diklon kemudiannya disahkan melalui penjujukan untuk memastikan ketepatan.
2. Pengoptimuman Gen untuk Ekspresi: Untuk ekspresi optimum dalam sistem sasaran (cth, sel mamalia, bakteria, atau sistem transkripsi in vitro), gen eGFP mungkin menjalani pengoptimuman kodon. Ini melibatkan penggantian kodon yang jarang ditemui dalam urutan asal dengan yang lebih kerap digunakan dalam organisma hos, meningkatkan peluang terjemahan yang cekap.
3. In vitro Penyediaan Templat Transkripsi: Setelah gen yang dioptimumkan sedia, ia digabungkan ke dalam vektor yang sesuai, selalunya plasmid, yang mengandungi unsur kawal selia yang diperlukan untuk transkripsi (cth, jujukan promoter). Plasmid ini berfungsi sebagai templat untuk transkripsi in vitro.
4. In vitro Transcription: Menggunakan templat plasmid yang disediakan, transkripsi in vitro dilakukan untuk mensintesis mRNA eGFP. Proses ini melibatkan penggunaan enzim polimerase RNA, yang mengenali urutan promoter dan memulakan transkripsi, menghasilkan untaian RNA pelengkap kepada templat DNA. Bergantung pada aplikasi yang diingini, mRNA mungkin dihadkan, dipoliadenilasi dan/atau diubah suai untuk meningkatkan kestabilan dan kecekapan terjemahan.
5. Pemurnian dan Kawalan Kualiti: MRNA eGFP yang disintesis kemudiannya disucikan untuk membuang sebarang bahan cemar, termasuk DNA, protein dan nukleotida bebas. Kaedah penulenan boleh termasuk elektroforesis gel, kromatografi lajur, atau pemisahan berasaskan manik. Selepas penulenan, mRNA dianalisis untuk kualiti, termasuk kepekatan, ketulenan dan integriti, menggunakan teknik seperti spektrofotometri UV-Vis dan elektroforesis gel.
6. Penyimpanan dan Penghantaran: MRNA eGFP yang telah disucikan biasanya disimpan pada suhu rendah untuk mengekalkan kestabilan. Untuk kegunaan percubaan, mRNA boleh dihantar ke dalam sel menggunakan pelbagai kaedah, termasuk elektroporasi, lipofection atau vektor virus, bergantung pada aplikasi khusus dan jenis sel sasaran.
7. Ungkapan dan Pengesahan: Sekali di dalam sel, mRNA eGFP diterjemahkan ke dalam protein pendarfluor hijau yang dipertingkatkan, yang boleh divisualisasikan menggunakan mikroskop pendarfluor. Ini membolehkan pengesahan pengeluaran, penghantaran dan ekspresi mRNA yang berjaya.

Ringkasnya, penghasilan mRNA eGFP melibatkan pengklonan gen, mengoptimumkannya untuk ekspresi, menyediakan templat transkripsi in vitro, melakukan tindak balas transkripsi, memurnikan mRNA yang terhasil, dan akhirnya menghantarnya ke dalam sel untuk ekspresi dan pengesahan.

Kami juga sedang giat mencari rakan kongsi global institusi atau individu. Kami menawarkan pampasan yang paling kompetitif dalam industri. Jika anda mempunyai sebarang pertanyaan, sila hubungi kami: [email protected]