Proses Pengeluaran mRNA eGFP

Pengeluaran mRNA eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) melibatkan siri teknik biologi molekul untuk menghasilkan molekul RNA yang berfungsi yang menyandikan bagi ungkapan eGFP. Dalam bidang mRNA eGFP, Yaohai Bio-Pharma telah mengumpul pengalaman yang luas dalam memenuhi keperluan spesifik pelanggan. Dengan memanfaatkan pengalaman kami, kami telah mensintesis aliran proses untuk mengeluarkan mRNA EGFP.

1. Kloning Gen eGFP : Untuk mendapatkan urutan gen yang menyandikan bagi eGFP. Gen ini biasanya diklon daripada vektor plasmid sedia ada atau disintesis secara buatan berdasarkan urutan nukleotida yang diketahui. Gen yang diklon kemudian diperiksa melalui penjenisan untuk memastikan kejituan.
2. Optimasi Gen untuk Ungkapan : Untuk ungkapan optimum dalam sistem sasaran (contohnya, sel mamalia, bakteria, atau sistem transkripsi in vitro), gen eGFP mungkin menjalani pengoptimuman kodon. Ini melibatkan penggantian kodon jarang dalam urutan asal dengan yang digunakan lebih kerap dalam organisma hos, meningkatkan kemungkinan translasi yang cekap.
3. Di luar badan Penyediaan Templat Transkripsi : Setelah gen yang telah dioptimumkan sedia, ia akan dilarikan ke dalam vektor yang sesuai, biasanya satu plasmid, yang mengandungi elemen kawalan yang diperlukan untuk transkripsi (contohnya, urutan promotor). Plasmid ini berkhidmat sebagai templat untuk transkripsi in vitro.
4. Di luar badan Transkripsi : Menggunakan plasmid templat yang telah disiapkan, transkripsi in vitro dilakukan untuk sintesis mRNA eGFP. Proses ini melibatkan penggunaan enzim polimerase RNA, yang mengenali urutan promotor dan memulakan transkripsi, menghasilkan rantai RNA yang komplemen kepada templat DNA. Bergantung kepada aplikasi yang diingini, mRNA mungkin diberi kubungan, poliadilen, dan/atau dimodifikasi untuk meningkatkan kestabilan dan kecekapan terjemah.
5. Pemurnian dan Kawalan Kualiti : mRNA eGFP yang disintesis kemudian diperbaiki untuk mengeluarkan sebarang bahan pencemar, termasuk DNA, protein, dan nukleotida bebas. Kaedah pemurnian boleh termasuk elektroforesis gel, kromatografi lajur, atau pemisahan berdasarkan biji. Selepas pemurnian, mRNA dianalisis untuk kualiti, termasuk konsentrasi, kepuretan, dan integriti, menggunakan teknik seperti spektrofotometri UV-Vis dan elektroforesis gel.
6. Penyimpanan dan Penghantaran : mRNA eGFP yang telah diperbaiki biasanya disimpan pada suhu rendah untuk menjaga kestabilannya. Untuk penggunaan eksperimen, mRNA boleh dikelirukan ke dalam sel menggunakan pelbagai kaedah, termasuk elektroporasi, lipofeksi, atau vektor viral, bergantung kepada aplikasi tertentu dan jenis sel sasaran.
7. Penyatahan dan Pengesahan : Setelah berada di dalam sel, mRNA eGFP ditafsirkan kepada protein fluoresen hijau terpilih, yang boleh dilihat menggunakan mikroskop fluoresen. Ini membolehkan pengesahan penyataan mRNA yang berjaya, penghantaran, dan penyataan.

Secara ringkas, pengeluaran mRNA eGFP melibatkan kloning gen, mengoptimumkannya untuk penyataan, menyediakan templat transkripsi in vitro, menjalankan tindak balas transkripsi, memurnikan mRNA yang dihasilkan, dan akhirnya menghantarinya ke dalam sel untuk penyataan dan pengesahan.

Kami juga aktif mencari rakan global institusi atau perorangan. Kami menawarkan ganti rugi paling kompetitif dalam industri ini. Jika anda ada sebarang soalan, sila rasa percuma untuk menghubungi kami: CRO@yaohaibio.cn