Mempertahankan Kaedah Modifikasi RNA Pelapor

Apabila memilih kaedah modifikasi mRNA pelapor yang lebih disukai, tiada jawapan pasti kerana setiap kaedah dan gen pelapor mempunyai kelebihan dan senario aplikasi masing-masing. Berikut adalah beberapa kaedah modifikasi mRNA dan gen pelapor yang biasa digunakan, bersama-sama dengan ciri-ciri dan kesesuaiannya.

kaedah Modifikasi mRNA

Metilasi:

1. m6A : Berkaitan dengan kestabilan mRNA, penyulitan, penterjemahan, dan pemprosesan miRNA. Cabaran pengesanan termasuk pemilihan antibodi dan penempatan.
2. 5' Cap Nm : Meningkatkan kestabilan, penyulitan, poliadilen, dan eksport nuklear. Menolong membezakan self-RNA daripada RNA asing.
3. Pseudouridylation : Mengubah kodon, meningkatkan kestabilan, dan berbalas kepada stres. Dikatalis oleh sintetase pseudouridine.

Penambahan Nukleotida Bukan Semula Jadi:

1. Diperkenalkan semasa transkripsi dengan strategi pengubahsuaian kimia dua kali ganda. Ia meningkatkan kestabilan, kecekapan, dan ungkapan protein.

Gen Pelapor

1. Gen Protein Fluoresen Hijau (GFP) : Kelebihan: Mudah dideteksi, sifat fluoresen stabil, tidak toksik kepada sel, sesuai untuk imej sel hidup. Kekurangan: Intensiti fluoresen terhad had.
2. Protein Fluoresen Hijau Terpantap (eGFP) : Kelebihan: Lebih cerah lebih daripada enam kali berbanding GFP jenis liar, menjadikannya lebih sesuai sebagai gen pelapor untuk mengkaji ungkapan gen, pengaturan, pembezaan sel, dan penempatan serta pengangkutan protein dalam organisma.
3. Protein Fluoresen Merah (contohnya, mCherry) : Kelebihan: Panjang gelombang pemberangsakan dan pancaran yang lebih panjang, menyebabkan latar belakang yang lebih rendah semasa imej intrasel, kecerlangan fluoresen yang sangat baik dan kefotostabilan, serta toksisiti sel yang lebih rendah. Kekurangan: Mungkin tidak digunakan sebanyak GFP dalam beberapa keadaan eksperimen.
4. Luciferase Api-api : Kelebihan: Dalam kehadiran ATP, ion magnesium, dan oksigen, ia boleh memacu oksidasi luciferin kepada oxyluciferin, mengeluarkan bioluminescens. Ia sesuai digunakan sebagai kawalan untuk mengkaji kecekapan terjemahan gen sasaran dalam sel mamalia, kelangsungan hidup sel, dan ujian imej in vivo.

Kesimpulan

Apabila memilih kaedah pengubahsuaian mRNA pelapor yang mana yang lebih disukai, ia bergantung pada objektif eksperimen tertentu, latar belakang penyelidikan, dan syarat eksperimen. Sebagai contoh, jika kepekaan tinggi diperlukan, eGFP mungkin pilihan yang lebih baik. Jika pemetaan pada panjang gelombang yang lebih panjang diperlukan untuk mengurangkan gangguan latar belakang, protein fluoresen merah seperti mCherry mungkin lebih sesuai. Selain itu, berdasarkan keperluan pengubahsuaian mRNA tertentu (contohnya, meningkatkan kestabilan, membaiki kecekapan terjemahan), kaedah pengubahsuaian yang sepadan boleh dipilih.

Sebagai yang pertama dan terbesar CRDMO biologik mikroba di China Tenggara, Yaohai Bio-Pharma menawarkan penyelesaian khas satu henti dari hulu ke hilir atau perkhidmatan secara individu, bermula dari sintesis RNA, kejuruteraan strain dan pembinaannya, pembangunan proses hulu dan hilir, sehingga pengeluaran bahan farmasi pada tahap GMP atau bukan GMP, dan perkhidmatan isi & selesai untuk pelbagai modalan, seperti mRNA, circRNA, plasmid RNA, protein rekombinan, peptida, enzim, anjakan tunggal antibodi dan VLPs untuk penggunaan manusia dan veterinar.

Yaohai Bio-Pharma juga aktif mencari rakan global, sama ada institusi atau perorangan, dan menawarkan ganti rugi paling kompetitif dalam industri. Jika anda mempunyai sebarang soalan, sila hubungi kami: [email protected]