Menjuarai Kaedah Pengubahsuaian RNA Reporter

Apabila memilih kaedah pengubahsuaian mRNA pelapor mana yang lebih disukai, tiada jawapan yang pasti kerana setiap kaedah dan gen pelapor mempunyai kelebihannya sendiri dan senario yang boleh digunakan. Berikut ialah beberapa kaedah pengubahsuaian mRNA biasa dan gen wartawan, bersama dengan ciri dan kesesuaiannya.

Kaedah Pengubahsuaian mRNA

Metilasi:

1. m6A: Dikaitkan dengan kestabilan mRNA, penyambungan, terjemahan dan pemprosesan miRNA. Cabaran pengesanan termasuk pemilihan antibodi dan penyetempatan.
2. 5' Cap Nm: Meningkatkan kestabilan, penyambungan, poliadenilasi, dan eksport nuklear. Membantu membezakan RNA diri daripada RNA asing.
3. Pseudouridylation: Mengubah kodon, meningkatkan kestabilan, dan bertindak balas kepada tekanan. Dimangkinkan oleh sintase pseudouridine.

Pengenalan Nukleotida Bukan Asli:

1. Diperkenalkan semasa transkripsi dengan strategi pengubahsuaian kimia dwi. Ia Meningkatkan kestabilan, kecekapan, dan ekspresi protein.

Gen Wartawan

1. Gen Protein Pendarfluor Hijau (GFP): Kelebihan: Mudah dikesan, sifat pendarfluor yang stabil, tidak toksik kepada sel, sesuai untuk pengimejan sel hidup. Kelemahan: Keamatan pendarfluor terhad.
2. Protein Pendarfluor Hijau Dipertingkat (eGFP): Kelebihan: Lebih 6 kali lebih cerah daripada GFP jenis liar, menjadikannya lebih sesuai sebagai gen wartawan untuk mengkaji ekspresi gen, pengawalseliaan, pembezaan sel, dan penyetempatan dan pengangkutan protein dalam organisma.
3. Protein Pendarfluor Merah (cth, mCherry): Kelebihan: Pengujaan dan panjang gelombang pelepasan yang lebih panjang, menghasilkan latar belakang yang lebih rendah semasa pengimejan intrasel, kecerahan pendarfluor dan kestabilan foto yang sangat baik, dan ketoksikan selular yang lebih rendah. Kelemahan: Mungkin tidak digunakan seperti GFP dalam keadaan percubaan tertentu.
4. Firefly Luciferase: Kelebihan: Dengan kehadiran ATP, ion magnesium, dan oksigen, ia boleh memangkinkan pengoksidaan luciferin kepada oxyluciferin, memancarkan bioluminesensi. Ia sesuai digunakan sebagai kawalan untuk mengkaji kecekapan terjemahan gen sasaran dalam sel mamalia, daya maju sel, dan ujian pengimejan in vivo.

Kesimpulan

Apabila memilih kaedah pengubahsuaian mRNA pelapor mana yang lebih disukai, ia bergantung pada objektif eksperimen tertentu, latar belakang penyelidikan dan keadaan eksperimen. Contohnya, jika sensitiviti tinggi diperlukan, eGFP mungkin merupakan pilihan yang lebih baik. Jika pengimejan pada panjang gelombang yang lebih panjang diperlukan untuk mengurangkan gangguan latar belakang, protein pendarfluor merah seperti mCherry mungkin lebih sesuai. Selain itu, berdasarkan keperluan pengubahsuaian khusus mRNA (cth, meningkatkan kestabilan, meningkatkan kecekapan terjemahan), kaedah pengubahsuaian yang sepadan boleh dipilih.

Sebagai CRDMO biologi mikrob yang pertama dan terbesar di Greater China, Yaohai Bio-Pharma menawarkan penyelesaian sehenti yang disesuaikan secara menyeluruh atau perkhidmatan kendiri daripada sintesis RNA, kejuruteraan terikan dan pembinaan, pembangunan proses huluan dan hiliran, kepada GMP atau bukan -Pengilangan bahan ubat peringkat GMP, dan perkhidmatan pengisian & kemasan untuk pelbagai modaliti, seperti mRNA, circRNA, RNA plasmid, protein rekombinan, peptida, enzim, antibodi domain tunggal dan VLP untuk kegunaan manusia dan veterinar.

Yaohai Bio-Pharma juga sedang giat mencari rakan kongsi global institusi atau individu dan menawarkan pampasan paling kompetitif dalam industri. Jika anda mempunyai sebarang pertanyaan, sila hubungi kami: [email protected]