mRNS integritāte
MRNS integritātes analīzes nozīme
mRNS ir atzītas par to raksturīgo nestabilitāti un ir jutīgas pret fragmentāciju ārējo faktoru klātbūtnē, īpaši in vitro transkripcijas (IVT) un attīrīšanas procesos, kur visuresošās nukleāzes rada izaicinājumu. MRNS integritātes novērtēšana ir ļoti svarīga turpmākajā uz mRNS balstītu zāļu izstrādē, nodrošinot gan drošību, gan produktu pieejamību.
Yaohai-BioPharma nodrošina visaptverošus mRNS integritātes pārbaudes pakalpojumus, izmantojot tādas metodes kā agarozes gēla elektroforēzi (AGE), kapilāro elektroforēzi (CEG) un augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju (HPLC), ievērojot stingrus kvalitātes standartus gan pētniecībā, gan klīniskajos pētījumos.
Normatīvās prasības mRNS integritātei
Saskaņā ar PVO normatīvajiem apsvērumiem “mRNS struktūras integritāte tiek uzskatīta par kritisku kvalitātes atribūtu mRNS izdalīšanai. Tādējādi ir nepieciešama kontrole mRNS integritātei, neskartas mRNS procentuālajai daļai, mRNS fragmentu procentuālajai daļai un tā tālāk.
Analītiskā metode
Analīze |
Metodes |
mRNS integritāte |
AGE, Agarozegelektroforēze |
CGE,Kapilārā elektroforēze |
CGE-LIF, kapilārā gēla elektroforēze ar gaismas inducētas fluorescences noteikšanu |
mRNS integritāte ar agarozes gēla elektroforēzi
Agarozes gēla elektroforēze ir plaši izmantots paņēmiens kopējās RNS integritātes novērtēšanai. Tas ietver RNS parauga darbināšanu uz denaturējoša agarozes gēla, kas iekrāsots ar etīdija bromīdu vai SYBR Green. Denaturējošais gēls, kas sastāv no agarozes, atvieglo RNS atdalīšanu atkarībā no izmēra, kad tiek pielietota elektriskā strāva. Negatīvi lādētajai RNS migrējot uz gēla pozitīvo galu, mazāki fragmenti pārvietojas ātrāk, kā rezultātā RNS molekulas tiek šķirotas pēc izmēra.
mRNS integritāte ar kapilārā gēla elektroforēzi
Kapilārā gēla elektroforēze (CGE) ir augstas izšķirtspējas analītiskā pieeja, kas ir būtiska RNS molekulu integritātes noteikšanai pēc garuma. Šim novērtējumam ir nozīme kvalitātes nodrošināšanā, efektivitātes izpratnē un ražošanas procesu optimizācijā. Līdzīgi kā agarozes gēla elektroforēze, CGE izmanto elektrisko strāvu, lai atdalītu RNS fragmentus, pamatojoties uz to lādiņu un izmēru. CGE gadījumā kapilārs ir piepildīts ar atdalīšanas gēla matricu, kas ievadīta ar fluorescējošu krāsu. RNS kustība gar kapilāru ir atkarīga no tā izmēra, un noteikšana tiek panākta, izmantojot ultravioletās (UV) vai gaismas inducētās fluorescences (LIF) detektorus.
EN
