Atskleidžiama optimali eGFP reporterio RNR dozė

Molekulinėje biologijoje ir biotechnologijoje sustiprintas žalias fluorescencinis baltymas (eGFP) tapo pagrindiniu reporterio genu dėl jo gebėjimo gaminti ryškiai žalią fluorescenciją esant 509 nm. Šis baltymas, iš pradžių išskirtas iš medūzos Aequorea victoria, yra tiesioginis aptikimo žymeklis žinduolių ląstelių kultūrose, palengvinantis transfekcijos efektyvumo stebėjimą ir optimizavimą. Tačiau kyla klausimas: kokia yra optimali eGFP reporterio RNR dozė norint pasiekti norimus ekspresijos lygius?

Tyrimai parodė, kad eGFP reporterio RNR efektyvumas labai priklauso nuo jos dozės, ypač cirkuliarinės RNR (cirRNR) ir savaime amplifikuojančios mRNR (saRNR) sistemų kontekste. Gento universiteto Nanomedicinos tyrimų grupės Katrien Remaut komandos atlikti tyrimai išryškino sudėtingą ryšį tarp saRNR dozės ir jos transliacijos efektyvumo tinklainės ląstelėse. Jie atrado, kad mažos saRNR dozės, mažesnės už įgimto imuninės sistemos aktyvacijos slenkstį, palengvina veiksmingą baltymų ekspresiją. Tai pabrėžia tikslios dozės kontrolės svarbą išnaudojant visą eGFP reporterio RNR potencialą.

Praktikoje dažniausiai naudojamos eGFP mRNR koncentracijos gali svyruoti nuo mikrogramų (μg) iki nanogramų mikrolitre (ng/μL). Pavyzdžiui, atliekant transfekcijos eksperimentus, buvo įrodyta, kad nuo 0.05 μg iki 0.5 μg eGFP mRNR dozės duoda reikšmingą ekspresijos lygį įvairiuose ląstelių tipuose, o teigiamų ląstelių procentas tam tikrais atvejais siekia net 99–100%. Pažymėtina, kad esant mažesnėms nei 0.1, XNUMX μg dozėms, saRNR ekspresijos lygis yra geresnis, palyginti su linijine mRNR, parodydamas jos saviamplifikacinį pranašumą.

eGFP reporterio RNR universalumas slypi ne tik ryškioje ir stabilioje fluorescencijoje, bet ir prisitaikymu prie skirtingų eksperimentinių sąrankų. Tyrėjai gali tiksliai sureguliuoti dozę, kad atitiktų jų konkrečius poreikius, užtikrinant tikslią genų ekspresijos lygio kontrolę. Dėl šios funkcijos eGFP yra neįkainojama priemonė tiriant genų funkciją, stebint ląstelių likimą ir optimizuojant transfekcijos protokolus.

Apibendrinant galima pasakyti, kad optimali eGFP reporterio RNR dozė labai priklauso nuo eksperimentinio konteksto ir norimų rezultatų. Kruopščiai parinkdami tinkamą dozę, mokslininkai gali panaudoti visą šio universalaus reporterio geno potencialą, gerindami mūsų supratimą apie molekulinius mechanizmus ir skatindami naujoves biotechnologijų srityje.

Yaohai Bio-Pharma yra pirmoji ir didžiausia biologinė medžiaga, skirta mikrobų ekspresijos sistemai CRDMO Didžiojoje Kinijoje. Esame įsipareigoję patenkinti savo pasaulinių klientų klinikinius ir komercinius biologinių vaistų, vakcinų ir diagnostikos, skirtų žmonėms ir veterinarijai, poreikius.

Taip pat aktyviai ieškome institucinių ar individualių pasaulinių partnerių. Mes siūlome konkurencingiausią atlyginimą pramonėje. Jei turite klausimų, nedvejodami susisiekite su mumis: [email protected]