EGFP mRNA gamybos procesas

EGFP (Patobrintas žaliasis fluorescencinis baltymas) mRNA gamyba yra sandarų molekulinės biologijos technikų serija, skirta funkcinių RNA molekulių, koduojančių eGFP išraišką, gauti. eGFP mRNA srityje Yaohai Bio-Pharma sutelkė plačią patirtį atitinkant klientų specifinius poreikius. Remiantis mūsų patirtimi, mes sukūrėme EGFP mRNA gamybos procesą.

1. EGFP gene klonavimas : Jame gaunamas gene sekos, koduojančios eGFP, nustatymas. Šis gens yra dažniausiai klonuojamas iš jau esamo plazmido vektoriaus arba sintezuojamas dirbtinai remiantis žinoma nukleotidų seka. Klonuotas genas tada patikrinamas sekavimu, kad būtų užtikrinta tikslumas.
2. Geno optimizavimas išraiškai : Norint pasiekti optimalų išraišką tiksliniame sistemoje (pvz., gyvūniniuose ląstelėse, bakterijose arba in vitro transkripcijos sistemose), eGFP genas gali būti kodonai optimizuojamas. Tai apima retų kodonų pakeitimą pradinėje sekoje dažniau naudojamais tos mazgos organizmo, padidindami efektyvios transliacijos tikimybę.
3. In vitro Transkripcijos šablono paruošimas : Kai optimizuotas genas yra paruoštas, jis įtraukiamas į tinkamą vektorių, dažniausiai plazmidą, kuris sudaro reguliavimo elementus, būtinus transkripcijai (pvz., promotorinę seką). Šis plazmidas vartojamas kaip šablonas in vitro transkripcijai.
4. In vitro Transkripcija : Naudojant paruoštą plazmido šabloną, in vitro transkripcija atliekama siekiant sintezuoti eGFP mRNA. Šis procesas apima RNA polimerazos enzimų naudojimą, kurie pripažįsta promotorių seką ir pradeda transkripciją, gamindami komplementarią RNA grandinę DNA šablonui. Atsižvelgiant į pageidaujamą taikymą, mRNA gali būti apversta, poliadenuota ir/ar modifikuota, kad būtų padidinta stabilumas ir vertimo efektyvumas.
5. Ištraukimas ir kokybės kontrolė : Sintezuota eGFP mRNA tada ištraukiama, norint pašalinti bet kokius taršytojus, įskaitant DNA, baltymus ir laisves nukleotidus. Ištraukimo metodus galima apimti gelelio elektroforezė, stulpelio chromatografija ar daiktuolių pagrindu atskyrimo metodą. Po ištraukimo, mRNA analizuojama dėl kokybės, įskaitant koncentraciją, grynystę ir integritetą, naudojant technikas tokias kaip UV-Vis spektrofotometrija ir gelelio elektroforezė.
6. Saugykla ir pristatymas : Išvalyta eGFP ribonukleotinė rūgštis paprastai saugoma mažais temperatūros lygiais, kad būtų užtikrinta jos stabilumas. Eksperimentiniams tikslams ribonukleotinę rūgštį galima perduoti į ląstas naudojant įvairias metodus, įskaitant elektroporaciją, lipofekciją arba viralinės vektoriaus sistemas, priklausomai nuo konkrečio privalomo ir paskirties ląstelių tipo.
7. Išsivystymas ir patvirtinimas : Kai ribonukleotinė rūgštis yra ląstelėse, ji vertimui pavertama į stiprintą žaliosios fluorescencijos baltąją, kuri gali būti matoma naudojant fluorescencinį mikroskopą. Tai leidžia patikrinti sėkmingą ribonukleotinės rūgšties gamybą, perdavimą ir išsivystymą.

Kviečiant, eGFP ribonukleotinės rūgšties gamyba apima geno klonavimą, jo optimizavimą išsivystymui, in vitro transkripcijos šabloną paruošimą, transkripcijos reakciją atliekant, gautą ribonukleotinę rūgštį išvalydami ir, galiausiai, ją perdavus į ląstas išsivystymo ir patvirtinimo tikslais.

Be to, aktyviai ieškome globalių institucinių ar asmeninių partnerių. Siūlome geresnį nei konkurentai atlyginimą. Jei turite bet kokios problemos, prašome ją kuo greičiau su mumis spręsti: [email protected]