eGFP mRNR gamybos procesas

eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNR gamyba apima daugybę molekulinės biologijos metodų, skirtų sukurti funkcinę RNR molekulę, koduojančią eGFP ekspresiją. eGFP mRNR srityje Yaohai Bio-Pharma yra sukaupusi didelę patirtį tenkindama specifinius klientų poreikius. Pasitelkę savo patirtį, susintetinome EGFP mRNR gamybos proceso eigą.

1. eGFP geno klonavimas: eGFP koduojančiai genų sekai gauti. Šis genas paprastai klonuojamas iš jau egzistuojančio plazmidės vektoriaus arba sintetinamas dirbtinai, remiantis žinoma nukleotidų seka. Tada klonuotas genas patikrinamas sekvenuojant, kad būtų užtikrintas tikslumas.
2. Genų optimizavimas ekspresijai: Siekiant optimalios ekspresijos tikslinėje sistemoje (pvz., žinduolių ląstelėse, bakterijose arba in vitro transkripcijos sistemose), eGFP genas gali būti optimizuojamas kodonu. Tai apima retų kodonų pakeitimą pradinėje sekoje dažniau naudojamais šeimininko organizme, padidinant veiksmingo vertimo galimybes.
3. In vitro Transkripcijos šablono paruošimas: Kai optimizuotas genas yra paruoštas, jis įtraukiamas į tinkamą vektorių, dažnai plazmidę, kurioje yra transkripcijai būtinų reguliavimo elementų (pvz., promotoriaus seka). Ši plazmidė naudojama kaip šablonas transkripcijai in vitro.
4. In vitro Transkripcija: Naudojant paruoštą plazmidės šabloną, atliekama in vitro transkripcija, siekiant susintetinti eGFP mRNR. Šiame procese naudojami RNR polimerazės fermentai, kurie atpažįsta promotoriaus seką ir inicijuoja transkripciją, gamindami DNR šabloną papildančią RNR grandinę. Priklausomai nuo pageidaujamo panaudojimo, mRNR gali būti uždengta, poliadenilinta ir (arba) modifikuota, siekiant padidinti stabilumą ir transliacijos efektyvumą.
5. Valymas ir kokybės kontrolė: Tada susintetinta eGFP mRNR išvaloma, kad būtų pašalinti bet kokie teršalai, įskaitant DNR, baltymus ir laisvuosius nukleotidus. Gryninimo metodai gali apimti gelio elektroforezę, chromatografiją kolonėlėje arba atskyrimą granulėmis. Po išgryninimo mRNR analizuojama dėl kokybės, įskaitant koncentraciją, grynumą ir vientisumą, naudojant tokius metodus kaip UV-Vis spektrofotometrija ir gelio elektroforezė.
6. Sandėliavimas ir pristatymas: Išgryninta eGFP mRNR paprastai laikoma žemoje temperatūroje, kad būtų išlaikytas stabilumas. Eksperimentiniam naudojimui mRNR gali būti įvedama į ląsteles naudojant įvairius metodus, įskaitant elektroporaciją, lipofekciją arba virusinius vektorius, priklausomai nuo konkrečios paskirties ir tikslinės ląstelės tipo.
7. Išraiška ir patikrinimas: Patekusi į ląstelę, eGFP mRNR paverčiama sustiprintu žaliu fluorescenciniu baltymu, kurį galima vizualizuoti naudojant fluorescencinę mikroskopiją. Tai leidžia patikrinti sėkmingą mRNR gamybą, pristatymą ir ekspresiją.

Apibendrinant, eGFP mRNR gamyba apima geno klonavimą, optimizavimą ekspresijai, in vitro transkripcijos šablono paruošimą, transkripcijos reakcijos atlikimą, gautos mRNR išgryninimą ir galiausiai pristatymą į ląsteles ekspresijai ir patikrinimui.

Taip pat aktyviai ieškome institucinių ar individualių pasaulinių partnerių. Mes siūlome konkurencingiausią atlyginimą pramonėje. Jei turite klausimų, nedvejodami susisiekite su mumis: [email protected]