Rekombinantinių baltymų kokybės kontrolė ir taikymas

Rekombinantinių baltymų kokybės kontrolė yra labai svarbi eksperimentinių duomenų patikimumui ir atkuriamumui. Kiekvienas žingsnis, nuo projekto projektavimo iki gamybos proceso, reikalauja griežtų kokybės kontrolės strategijų.

Kokybės kontrolės strategijos

Pramonės sektorius laikosi griežtų standartinių veiklos procedūrų, o akademinė bendruomenė turi tobulinti profesines žinias, kad pagerintų duomenų atkuriamumą. Baltymams, turintiems specifinį biologinį pritaikymą arba biochemines savybes, reikia pritaikytų kokybės kontrolės (QC) strategijų.

Sudėtingi pavyzdžiai ir sprendimai

„Yaohai Bio-Pharma“ turi didelę rekombinantinių baltymų gamybos ir valymo patirtį, kartu su ekspertų komanda užtikrina, kad jūsų baltymų gamyba būtų baigta labai grynai. Naudodamasi šimtų projektų patirtimi, Yaohai maloniai apibendrina, kaip optimizuoti baltymų valymą.

Nukleino rūgštis surišantys baltymai: Nukleino rūgščių pašalinimo etapai, tokie kaip nukleazės arba PEI nusodinimas, yra būtini. A260nm/A280nm santykis stebimas, kad būtų galima nustatyti užteršimą nukleino rūgštimis.

Pelės feritino sunkioji grandinė 1, skirta krio-EM: Norint sumažinti A260nm/A280nm santykį ir užtikrinti baltymų grynumą, reikia optimizuoti valymo etapus ir pridėti nukleazių.

Chimerinis žmogaus baltymas dsRBEC: Ląstelių lizei naudojamas buferis, kuriame yra karbamido, po to perlankstoma kolonėlėje, kad būtų gauti funkciškai aktyvūs baltymai.

Baltymus, jungiančius dvivalečius katijonus: Ekspresijos ir gryninimo metu reikia pridėti specifinių dvivalenčių katijonų ir vengti kompleksonų.

Geležies-sieros baltymai: Reikia vengti imidazolo, kad būtų išvengta [2Fe ± 2S] klasterio sutrikimo, užtikrinant teisingą baltymų susilankstymą ir funkciją.

Tirpus LLT1 fragmentas: Mutantų konstrukcija optimizuoja disulfidinių jungčių susidarymą ir baltymų sulankstymą, todėl gaunami stabilūs ir didelio derlingumo baltymai.

CLK1 kinazės kristalizacija: Bendra ekspresija su λ-fosfataze pašalina fosfatus iš fosforilinimo vietų, o dydžio išskyrimo chromatografija (SEC) ir anijonų mainų chromatografija naudojama homogeniškam CLK1 be heterogeninio fosforilinimo gauti.

Baltymai antigenams naudoti: Grynumo vertinimas yra būtinas siekiant išvengti užteršimo labai imunogeniškais baltymais. Struktūrinių epitopų antikūnų atveju turi būti išlaikyta trimatė antigeno konformacija.

Agregacijai linkę baltymai: Siekiant apriboti agregacijos problemas, naudojamos tokios strategijos, kaip skirtingų padermių atranka ir auginimo temperatūros mažinimas, ir kuriamos greitos valymo strategijos.

Endotoksinų pašalinimas: Tokie metodai kaip teigiamo krūvio chromatografija ir polikatijono ligandų afininė chromatografija pašalina endotoksinus ir užtikrina, kad LPS lygis būtų mažesnis už taikymo ribas.

Baltymų kompleksai: Subvienetai ekspresuojami atskirai ir surenkami in vitro arba kartu ekspresuojami, kad susidarytų funkciniai kompleksai. Komplekso vientisumas vertinamas pagal homogeniškumą ir molinę masę.

Išvada

Baltymų gamyba prasideda nuo strateginio projektavimo, atsižvelgiant į biochemines savybes ir pritaikymą. Ekspresijos, gryninimo ir kokybės kontrolės metu sąlygos ir metodai yra optimizuoti stabilumui, neagregacijai ir natūraliai būsenai. Išgryninti baltymai naudojami įvairiems tolesniems tikslams, pavyzdžiui, biofizikiniam apibūdinimui.

Yaohai Bio-Pharma taip pat aktyviai ieško institucinių ar atskirų pasaulinių partnerių ir siūlo konkurencingiausią atlygį pramonėje. Jei turite klausimų, nedvejodami susisiekite su mumis: [email protected]