Rekombinantinio žmogaus insulino valymo proceso optimizavimas

Pastaraisiais metais diabetu sergančių pacientų augimas paskatino insulino poreikį, tačiau prieinamo insulino trūksta. Veiksminga ir ekonomiška insulino gamyba yra labai svarbi. Dėl spartaus augimo ir mažų sąnaudų daugiausia gaminama per Escherichia coli (E. coli) ir mieles, todėl E. coli susiduria su sudėtingu tolesniu apdorojimu.

Tolesnio apdorojimo apžvalga:

Rekombinantinio žmogaus insulino valymas iš E. coli inkliuzinių kūnų apima kelis etapus, įskaitant regeneravimą, plovimą, tirpinimą ir oksidavimą, skilimą, buferio keitimą, chromatografinį gryninimą, nusodinimą, renatūravimą, fermentinį skilimą ir formulavimą.

Yaohai Bio-Pharma turi didelę rekombinantinio insulino gamybos ir valymo patirtį, kartu su ekspertų komanda užtikrina, kad insulino gamyba būtų baigta labai efektyviai. Naudodamasi šimtų projektų patirtimi, Yaohai maloniai apibendrina, kaip optimizuoti rekombinantinio žmogaus insulino valymo procesą.

Inkliuzinio kūno atkūrimas ir plovimas:

Ląstelės ardomos mechaniniais metodais (pvz., ultragarsu, homogenizavimu aukštu slėgiu) arba apdorojimu lizocimu, po to plaunami buferiai (sudėtyje yra karbamido, Triton X-100 ir kt.), siekiant pašalinti priemaišas. Skalbimo metu reikia optimizuoti parametrus, kad būtų užtikrinta baltymų kokybė ir kontroliuojamos išlaidos.

Inkliuzinio kūno tirpinimas ir oksidacija:

Didelės koncentracijos denatūrantai (pvz., guanidino hidrochloridas ir karbamidas) naudojami inkliuzų kūnams tirpinti, į kuriuos pridedama ditiotreitolio arba β-merkaptoetanolio, kad nesusidarytų neteisingos disulfidinės jungtys. pH ir temperatūra reikšmingai veikia tirpinimo ir oksidacijos reakcijas.

Skilimas ir buferio mainai:

Cianogeno bromido skilimas naudojamas N-galą inicijuojančiai aminorūgščiai pašalinti, tačiau tai kelia toksiškumo ir mažo specifiškumo problemų. Taikant dializę, ultrafiltravimą arba dydžio išskyrimo chromatografiją, buferio keitimas pašalina kenksmingus reagentus ruošiantis tolesnėms operacijoms.

Chromatografinis valymas ir nusodinimas:

Insulinui išvalyti naudojami keli chromatografiniai metodai, įskaitant afininę chromatografiją, jonų mainų chromatografiją, atvirkštinės fazės chromatografiją, hidrofobinės sąveikos chromatografiją ir dydžio išskyrimo chromatografiją. Priemaišoms pašalinti ir baltymams koncentruoti naudojami nusodinimo metodai, tokie kaip pH nusodinimas ir cinko kristalizacija.

Renatūravimas:

Solibilizuotas baltymas skiedžiamas renatūracijos buferiu, kad būtų skatinamas teisingas disulfidinių jungčių susidarymas ir baltymų susilankstymas. Baltymų lankstymo skysčių chromatografija ir dializė taip pat yra renatūravimo metodai.

Fermentinis skilimas ir formulavimas:

Tripsinas ir karboksipeptidazė B naudojami C-peptidui suskaidyti, sudarydami aktyvų insulino heterodimerą. Galiausiai, kristalizavimas ir liofilizavimas yra naudojami druskų ir buferių likučiams pašalinti, taip paruošiant stabilią kompoziciją. Tam, kad būtų patenkinti įvairūs klinikiniai poreikiai, pridedami specifiniai priedai (pvz., cinkas ir protaminas).

Išvada:

Tolesnis insulino apdorojimas iš E. coli yra sudėtingas. Ateityje dėmesys turėtų būti skiriamas šių žingsnių optimizavimui, kad gamyba būtų efektyvi, ekonomiška, kad būtų patenkinta paklausa ir sumažintos sąnaudos.

Yaohai Bio-Pharma taip pat aktyviai ieško institucinių ar atskirų pasaulinių partnerių ir siūlo konkurencingiausią atlygį pramonėje. Jei turite klausimų, nedvejodami susisiekite su mumis: [email protected]