Perdirbimo proceso optimizavimas rekombinantam žmogaus insulino gamybai

Naujųjų metų metu diabeto ligos pacientų augimas sukėlė insulinui didesnę paklausą, tačiau prieinamas insulinas yra trūkumas. Efektyvus ir ekonomiškas insulino gamybos procesas yra labai svarbus. Insulinas pagrindiniu būdu gamintas naudojant Escherichia coli (E. coli) ir grybą dėl jų greito augimo ir žemos kainos, nors E. coli susiduria su sudėtingais tobulinimo procesais.

Apžvalga apie tobulinimo procesą:

Rekombinantinio žmogaus insulino iš E. coli inkluzinių kūnulių purifikavimas yra daugiaetapis procesas, įskaitant atgaunimą, plautuvimą, sprendinio paruošimą ir oksidaciją, šiekšlių atskyrimą, buferių keitimą, chromatografine purifikaciją, kristalizaciją, renatūraciją, enzymine šiekšlių atskyrimą ir formuliaciją.

Yaohai Bio-Pharma gali pasiteisinti plačiai patirtimi rekombinantinio insulino gamybos ir purifikavimo srityje, kartu turint ekspertų komandą, užtikrinančią, kad jūsų insulino gamyba bus baigta aukšta efektyvumu. Remiantis šimtų projektų patirtimi, Yaohai linkęs sumariuoti, kaip optimizuoti rekombinantinio žmogaus insulino tobulinimo procesą.

Įtraukinių kūno atgaivinimas ir plautuvėjimas:

Ląstelės sutrupinamos naudojant mechanines metodes (pvz., ultragarso, aukštos slėgio homogenizavimas) arba lizosomo apdorojimą, o paskui naudojami plautuvėjimo buferiai (turintys ureą, Triton X-100 ir kt.), kad pašalinti dengmenis. Plautuvėjimo metu reikia optimizuoti parametrus, kad užtikrinti baltymo kokybę ir kontroliuoti išlaidas.

Įtraukinių kūno suliejimas ir oksidacijos procesas:

Naudojami aukštos koncentracijos denatūrantai (pvz., chloridas guanidino ir urea), kad sulieti įtraukinius kūnus, o dithiothreitolis arba β-merkaptoetanolis pridedami, kad išvengti netinkamų disulfidinių jungčių formavimosi. pH ir temperatūra didelį poveikį daro suliejimo ir oksidacijos reakcijoms.

Skilimas ir buferių keitimas:

Cianogeno bromido šlaitas naudojamas, kad pašalintų N-terminalio pradinį aminorąkštį, tačiau jis kelia toksinius ir mažos specifumo problemas. Buferio keitimas per dializę, ultrafiltraciją ar dydžio atskyrimo chromatografiją pašalina kenksmingus reagentus, paruošiant sistemą kitoms operacijoms.

Chromatografinei išskaidymo ir sriubinimo procedūrai:

Yra naudojamos kelios chromatografines technikos insulino išvalymui, įskaitant afiniteto chromatografiją, jonų mainų chromatografiją, atvirkštinės fazės chromatografiją, hidrofobinio sąveikos chromatografiją ir dydžio atskyrimo chromatografiją. Sriubinimo metoduose, pvz., pH sriubinimu ir dalelių kristalinimo, yra naudojami būdai pašalinti tarpmarsčius ir koncentruoti baltymus.

Renatūracija:

Išsisklaidęs baltymas yra sumažinamas renatūracijos buferiu, kad skatintų teisingą disulfidinių jungčių formavimąsi ir baltymo suolėjimą. Baltymo suolėjimo skysčio chromatografija ir dializė taip pat yra naudojami renatūracijos metodu.

Enzyminė šluota ir formuliacija:

Tripsinas ir karboksipeptidazas B naudojami, kad išskirtų C-peptidą, sudarant aktyvų insulino heterodimerą. Galiausiai, kristalinizacijos ir liofilizacijos metodu yra pašalinami liekaningi druskos ir buferiai, paruošiant stabilų formulę. Pridedami specifiniai priedai (pvz., cinkas ir protaminas), kad atitiktų skirtingus klininius poreikius.

Išvada:

Insulino tobulinimo procesas iš E. coli yra sudėtingas. Būsimasis dėmesys turėtų būti sutelktas į šių etapų optimizavimą efektyviam ir ekonomiškam gamybos procesui, kad patenkintų paklausą ir sumažintų išlaidas.

Yaohai Bio-Pharma taip pat aktyviai ieško visuotinių partnerių, institucijų ar asmenų, ir siūlo geresnį nei konkurentai atlygį šioje srityje. Jei turite klausimų, prašome ją kreiptis: [email protected]