Pirmaujantys reporterio RNR modifikavimo metodai

Renkantis, kuris reporterio mRNR modifikavimo metodas yra geresnis, nėra galutinio atsakymo, nes kiekvienas metodas ir reporterio genas turi savo privalumų ir taikomus scenarijus. Štai keletas bendrų mRNR modifikavimo metodų ir reporterių genų, taip pat jų charakteristikos ir tinkamumo.

mRNR modifikavimo metodai

Metilinimas:

1. m6A: Susijęs su mRNR stabilumu, sujungimu, vertimu ir miRNR apdorojimu. Aptikimo iššūkiai apima antikūnų atranką ir lokalizaciją.
2. 5' dangtelis Nm: Padidina stabilumą, sujungimą, poliadenilinimą ir branduolinį eksportą. Padeda atskirti savo RNR nuo svetimos RNR.
3. Pseudouridilinimas: pakeičia kodonus, padidina stabilumą ir reaguoja į stresą. Katalizuojamas pseudouridino sintazės.

Nenatūralių nukleotidų įvadas:

1. Įvesta transkripcijos metu naudojant dvigubą cheminio modifikavimo strategiją. Tai padidina stabilumą, efektyvumą ir baltymų ekspresiją.

Reporteris Genai

1. Žaliojo fluorescencinio baltymo genas (GFP): Privalumai: Lengvai aptinkamas, stabilios fluorescencinės savybės, netoksiškas ląstelėms, tinka gyvų ląstelių vaizdavimui. Trūkumai: ribotas fluorescencijos intensyvumas.
2. Patobulintas žalias fluorescencinis baltymas (eGFP): Privalumai: Daugiau nei 6 kartus ryškesnis nei laukinio tipo GFP, todėl jis labiau tinkamas kaip reporterio genas tiriant genų ekspresiją, reguliavimą, ląstelių diferenciaciją ir baltymų lokalizaciją bei transportavimą organizmuose.
3. Raudoni fluorescenciniai baltymai (pvz., mCherry): Privalumai: ilgesni sužadinimo ir emisijos bangos ilgiai, dėl to mažesnis fonas atliekant intracelulinį vaizdą, puikus fluorescencijos ryškumas ir fotostabilumas bei mažesnis toksiškumas ląstelėms. Trūkumai: tam tikromis eksperimentinėmis sąlygomis gali būti ne taip dažnai naudojamas kaip GFP.
4. Firefly Liuciferazė: Privalumai: Esant ATP, magnio jonams ir deguoniui, jis gali katalizuoti luciferino oksidaciją į oksiluciferiną, išskirdamas bioliuminescenciją. Jis tinkamas naudoti kaip kontrolė tiriant tikslinių genų transliacijos efektyvumą žinduolių ląstelėse, ląstelių gyvybingumą ir in vivo vaizdavimo tyrimus.

Išvada

Renkantis, kuris reporterio mRNR modifikavimo metodas yra priimtinesnis, tai priklauso nuo konkrečių eksperimentinių tikslų, tyrimų pagrindų ir eksperimentinių sąlygų. Pavyzdžiui, jei reikalingas didelis jautrumas, eGFP gali būti geresnis pasirinkimas. Jei norint sumažinti fono trukdžius reikia vaizduoti ilgesniais bangos ilgiais, raudonai fluorescenciniai baltymai, tokie kaip mCherry, gali būti tinkamesni. Be to, atsižvelgiant į specifinius mRNR modifikavimo poreikius (pvz., didinant stabilumą, gerinant vertimo efektyvumą), galima pasirinkti atitinkamą modifikavimo metodą.

„Yaohai Bio-Pharma“, kaip pirmasis ir didžiausias mikrobų biologinių medžiagų CRDMO Didžiojoje Kinijoje, siūlo visapusiškus individualius sprendimus arba atskiras paslaugas, pradedant RNR sinteze, padermių inžinerija ir konstravimu, procesų kūrimu iki ir paskesnio iki GMP ar ne. - GMP lygio vaistinių medžiagų gamyba ir užpildymo bei užbaigimo paslaugos įvairiems būdams, pvz., mRNR, cirRNR, plazmidinės RNR, rekombinantinės baltymai, peptidai, fermentai, vieno domeno antikūnai ir VLP, skirti naudoti žmonėms ir veterinarams.

Yaohai Bio-Pharma taip pat aktyviai ieško institucinių ar atskirų pasaulinių partnerių ir siūlo konkurencingiausią atlygį pramonėje. Jei turite klausimų, nedvejodami susisiekite su mumis: [email protected]