Atstovaujančios Reporter RNA modifikacijos metodus

Pasirenkant, kuri pranešimo mRNAs modifikacijų metodu reikia pasirinkti, išsamus atsakymą nėra, nes kiekvienas metodas ir pranešimo genas turi savo privalumus ir taikomus scenarijus. Čia pateikiame dažniausius mRNAs modifikavimo metodus ir pranešimo genes kartu su jų savybėmis ir tinkamumo aspektais.

mRNA Modifikavimo Metodai

Metilavimas:

1. m6A : Susijęs su mRNAs stabilumu, splicingu, vertimais ir miRNA apdorojimu. Aptikimo iššūkiai apima antikūgulių pasirinkimą ir lokalizavimą.
2. 5' Kapas Nm : Patobulina stabilumą, splicingą, poliadenilaciją ir branduolio eksportą. Padeda atskirti savo RNA nuo užsienio RNA.
3. Pseudouridyliacija : Keičia kodonus, patobulina stabilumą ir reaguojama į stresą. Katalizuojama pseudouridino sintezatoriais.

Nenuosčiųjų nukleotidų įvedimas:

1. Įvedama per transkripciją su dviemis chemines modifikacijos strategijomis. Ji padidina stabilumą, efektyvumą ir baltymų išsisklaidymą.

Ataskaitų genai

1. Žaliosios fluorescencinės baltiesis genas (GFP) : Privalumai: Paprasti aptikti, stabilios fluorescencijos savybės, nekenksmingi ląstelėms, tinkami gyvosms ląstelių vaizdavimui. Trūkumai: Riboti fluorescencijos intensyvumas.
2. Pabarstinta žalioji fluorescencinė baltis (eGFP) : Privalumai: Daugiau nei šešis kartus ryškesnė už natūralią GFP, todėl ji yra labiau tinkama kaip ataskaitų genas tyrime apie genų išraišką, reguliaciją, ląstelių diferenciaciją ir baltymų lokalizaciją bei transportą organizmuose.
3. Raudonosios fluorescencinės baltys (pvz., mCherry) : Privalumai: Ilgesni pobūdisimo ir išmetimo bangų ilgiai, dėl kurių mažesnis fono intracelių vaizdavime, puiki fluorescencijos ryškumo ir fotostabilumo, mažesnė ląstelių kenksmingumas. Trūkumai: Gali nebūti taip paprasčiausiai naudojamas kaip GFP tam tikrose eksperimentinių sąlygose.
4. Vokietės svogūnas : Perspektyvos: Įvykdžius sąlygas – esant ATP, magnio jonams ir deguoniui – ji gali katalizuoti luciferino oksidaciją į oksiluciferiną, išsisklindama bioluminescencija. Jos galima naudoti kaip kontrolę tyrinėdami tikslinių genų tradukavimo efektyvumą šaulių ląstelėse, ląstelių gyvybę bei in vivo vaizdavimo tyrimus.

Išvada

Pasirenkant ataskaitos mRNA modifikacijos būdą, reikia remtis specifiniais eksperimentinių tikslų, tyrimų konteksto ir sąlygų poreikiais. Pavyzdžiui, jei reikalinga aukšta jautrumo lygis, eGFP gali būti geresnis pasirinkimas. Jei reikia ilgesnių bangų ilgių vaizdavimo siekiant sumažinti foninę traukimą, raudonos fluorescencijos pigmentai, tokie kaip mCherry, gali būti tinkamesni. Be to, atsižvelgiant į specifinius mRNA modifikavimo poreikius (pvz., stabilumo didinimas, tradukavimo efektyvumo pagerinimas), galima pasirinkti atitinkamą modifikavimo metodą.

Būdamas pirmuoju ir didžiausiu mikroorganizmų biologinių gaminių CRDMO Didžiojojo Kinijos regione, Yaohai Bio-Pharma siūlo viso etapo vietoje sprendimus arba atskirus paslaugas, kurios kartoja nuo RNA sintezės, šilutės inžinerijos ir konstravimo, viršutinio ir apatinio procesų plėtojimo iki GMP arba ne-GMP lygio medžiagų gamybos bei užpildymo ir pabaigos paslaugų skirtingoms modalitetėms, pvz., mRNA, circRNA, plazmino RNA, rekombinantiniams baltymams, peptidams, enzymams, vienam domenui esantiems antikorpams ir VLPs žmoniškai ir veterinarijos naudojimui.

Yaohai Bio-Pharma taip pat aktyviai ieško visuotinių partnerių, institucijų ar asmenų, ir siūlo geresnį nei konkurentai atlygį šioje srityje. Jei turite klausimų, prašome ją kreiptis: [email protected]