หมวดหมู่ทั้งหมด
ENEN
การแสดงลักษณะเฉพาะของ mRNA polyA

การแสดงลักษณะเฉพาะของ mRNA polyA

หน้าแรก >  การแสดงลักษณะเฉพาะของ mRNA polyA

การแสดงลักษณะเฉพาะของโพลี (A) mRNA 3'

การแสดงลักษณะเฉพาะของโพลี (A) mRNA 3'

ส่วนท้ายโพลี (A) ขนาด 3 ฟุต (โพลีอะดีโนซีน) ของ mRNA เป็นส่วนสำคัญของการควบคุมหลังการถอดรหัส ซึ่งมีอิทธิพลต่อการส่งออก mRNA ความเสถียร และการแปล ในกรณีของ mRNA ที่ถูกถอดรหัสภายนอกร่างกาย (IVT) ส่วนท้ายของโพลี(A) ถูกนำมาใช้ในระหว่างการถอดรหัสร่วมในลักษณะที่เป็นเทมเพลตหรือผ่านกระบวนการหางของเอนไซม์ในลักษณะที่ไม่ใช่เทมเพลต โพลี(A) ขนาด 3 ฟุตนี้ทำหน้าที่เป็นคุณลักษณะด้านคุณภาพวิกฤต (CQA) สำหรับ IVT RNA ซึ่งจำเป็นต้องมีการระบุลักษณะเฉพาะอย่างละเอียดในระหว่างการพัฒนากระบวนการและการปล่อยเป็นชุด

Yaohai Bio-Pharma ให้บริการวิเคราะห์ลักษณะเฉพาะของโพลี(A) ขนาด 3 ฟุต โดยใช้เทคนิคต่างๆ เช่น การแตกตัวของไรโบนิวคลีเอส T1 (RNase T1) โครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงเฟสกลับไอออน (IP-RP-HPLC)/โครมาโตกราฟีของเหลว-แมสสเปกโตรเมทรี (LC-MS) และการวิเคราะห์ข้อมูลอย่างครอบคลุม

ข้อกำหนดตามกฎข้อบังคับสำหรับการแสดงคุณลักษณะโพลี(A) ของ mRNA 3'

ตามการพิจารณาด้านกฎระเบียบของ WHO “ความสมบูรณ์ของโครงสร้างของ mRNA ถือเป็นคุณลักษณะด้านคุณภาพที่สำคัญสำหรับการปล่อย mRNA ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีการควบคุมเพื่อความสมบูรณ์ของ mRNA ประสิทธิภาพการปิดฝา 5′ การมีอยู่หรือความยาวส่วนหาง 3′ poly(A) และอื่นๆ”

วิธีวิเคราะห์

การวิเคราะห์

วิธีการ

การแสดงคุณลักษณะโพลี (A) ของ mRNA 3'

LC-MS หลังการย่อยอาหาร
การรักษาอื่นๆ
ขั้นตอนที่ 1. ความแตกแยกของ RNase T1

การวิเคราะห์โดยตรงของ mRNA ที่สมบูรณ์ความยาวสมบูรณ์โดย LC-MS นั้นไม่สามารถทำได้เนื่องจากขนาดและความหลากหลาย ในการตรวจสอบส่วนหางของโพลี (A) จะต้องแยกส่วนนั้นออกจาก mRNA ที่มีความยาวเต็ม วิธีที่แพร่หลายเกี่ยวข้องกับการย่อยด้วยเอนไซม์ด้วย RNase T1 โดยเลือกแยกส่วนปลาย 3′ ของ rG ในขณะที่รักษาลำดับโพลี (A) ไว้ ตัวอย่าง mRNA ผ่านการย่อยด้วย RNase T1 และชิ้นส่วนของรอยแยกที่มีส่วนยืดโพลี(A) ถูกแยกออกโดยใช้เม็ดบีดแม่เหล็กเคลือบโอลิโก dT

ขั้นตอนที่ 2 IP-RP-HPLC/LC-MS

ส่วนหางที่ถูกแยกได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ LC-MS ซึ่งนำเสนอข้อมูลความยาวส่วนหางที่แม่นยำที่ความละเอียดนิวคลีโอไทด์เดี่ยว ในการวิเคราะห์โอลิโกนิวคลีโอไทด์ LC-MS การแยกเฟสแบบกลับด้านการจับคู่ไอออน (IP-RP) กับสารเติมแต่งเฟสเคลื่อนที่ของเอมีนถือเป็นโหมดโครมาโตกราฟีที่ต้องการ เนื่องจากมีกำลังการแยกภาพที่แข็งแกร่งและความเข้ากันได้กับแมสสเปกโตรเมทรี (MS)

ขั้นตอนที่ 3 การวิเคราะห์ข้อมูล

ความยาวหางโพลี (A) และปริมาณสัมพัทธ์ของมันขึ้นอยู่กับจำนวนและความเข้มของพีคหารด้วยมวลของอะดีโนซีน เมื่อประมวลผลหรือแยกส่วนสเปกตรัมมวล มวลที่คาดไว้ของส่วนหางโพลี 100 เมอร์ (A) (33,163 Da ในกล่อง) จะถูกมองเห็น พร้อมด้วยชุดของมวลที่เว้นระยะห่าง 329 amu เทียบเท่ากับมวลของอะดีโนซีน (A) .

กรณีของการวิเคราะห์ลักษณะโพลี (A) ขนาด 3 'ด้วย LC–MS

Yaohai-BioPharma ได้พัฒนาวิธีการที่มีประสิทธิภาพสำหรับการวิเคราะห์ลักษณะเฉพาะของ mRNA 3' poly(A) ซึ่งรวมถึงการแยก RNase T1 และ IP-RP-HPLC/LC-MS

图片 2

Yaohai-BioPharma ได้พัฒนาวิธีการที่มีประสิทธิภาพสำหรับการวิเคราะห์ลักษณะเฉพาะของ mRNA 3' poly(A) ซึ่งรวมถึงการแยก RNase T1 และ IP-RP-HPLC/LC-MS

กดรับใบเสนอราคา

ติดต่อเรา