หมวดหมู่ทั้งหมด
ENEN
ประสิทธิภาพการกำหนด mRNA

ประสิทธิภาพการกำหนด mRNA

หน้าแรก >  ประสิทธิภาพการกำหนด mRNA

ประสิทธิภาพการกำหนด mRNA 5'

ความสำคัญของการวิเคราะห์ประสิทธิภาพ mRNA 5'capping

โครงสร้างหมวกซึ่งอยู่ที่ปลาย 5′ ของ mRNA มีบทบาทสำคัญในการแปล การทำให้เสถียร และการขนส่ง mRNA ภายในยูคาริโอตอย่างมีประสิทธิภาพ ในบริบทของ mRNA ที่ถูกถอดรหัสภายนอกร่างกาย (IVT) แคปขนาด 5' ถูกนำมาใช้ผ่านกระบวนการปิดฝาแบบถอดรหัสร่วมหรือกระบวนการปิดฝาด้วยเอนไซม์ เนื่องจากเป็นส่วนประกอบที่ขาดไม่ได้ของ IVT RNA ฝาขนาด 5′ จึงเป็นคุณลักษณะด้านคุณภาพที่สำคัญ (CQA) ซึ่งจำเป็นต้องมีการระบุลักษณะเฉพาะที่ครอบคลุมตลอดการพัฒนากระบวนการและการปล่อยแบทช์

Yaohai-Bio Pharma นำเสนอโซลูชันการวิเคราะห์ประสิทธิภาพการปิดฝาขนาด 5' ที่ครอบคลุม ครอบคลุมการออกแบบเฝือกโอลิโกนิวคลีโอไทด์ (โพรบ), การแยก RNase H, โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงเฟสกลับ IP-RP- ไอออนคู่ (IP-RP-HPLC)/โครมาโตกราฟีของเหลว -แมสสเปกโตรเมทรี (LC-MS) การวิเคราะห์ข้อมูล

ข้อกำหนดด้านกฎระเบียบสำหรับความสมบูรณ์ของ mRNA

ตามการพิจารณาด้านกฎระเบียบของ WHO “ความสมบูรณ์ของโครงสร้างของ mRNA ถือเป็นคุณลักษณะด้านคุณภาพที่สำคัญสำหรับการปล่อย mRNA ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีการควบคุมเพื่อความสมบูรณ์ของ mRNA ประสิทธิภาพการปิดฝา 5′ การมีอยู่หรือความยาวส่วนหาง 3′ poly(A) และอื่นๆ”

วิธีวิเคราะห์

การวิเคราะห์

วิธีการ

ประสิทธิภาพการกำหนด mRNA 5'

LC-MS หลังการย่อยอาหาร
การรักษาอื่นๆ
ขั้นตอนที่ 1 การออกแบบเฝือกโอลิโกนิวคลีโอไทด์ (โพรบ)

โพรบตรวจแยกซึ่งรวม 2'-O-เมทิลนิวคลีโอไทด์และเตตราออกซีไรโบนิวคลีโอไทด์ ทำหน้าที่แยกสาย RNA เสริมที่ตำแหน่งเฉพาะเมื่อมี RNase H ปรากฏ วิธีการนี้พิสูจน์ได้ว่ามีคุณค่าอย่างมากสำหรับการสร้างชิ้นส่วน RNA ขนาดใหญ่ตามเป้าหมาย

ขั้นตอนที่ 2. RNase H ความแตกแยก

โพรบแบบไบโอทินิเลตได้รับการออกแบบอย่างมีกลยุทธ์เพื่อเสริมกับ mRNA ส่วนปลาย 5' ใช้ร่วมกับ RNase H เพื่อเร่งปฏิกิริยาการแตกแยกที่เป็นเป้าหมายของโอลิโกนิวคลีโอไทด์ส่วนปลาย 5' ที่มีโครงสร้างฝาครอบ

ขั้นตอนที่ 3 IP-RP-HPLC/LC-MS

ในการวิเคราะห์โอลิโกนิวคลีโอไทด์ LC-MS โหมดโครมาโตกราฟีที่ต้องการคือการแยกเฟสแบบย้อนกลับด้วยการจับคู่ไอออน (IP-RP) โดยใช้สารเติมแต่งเฟสแบบเคลื่อนที่ของเอมีน เนื่องมาจากกำลังการแยกรายละเอียดที่เหนือกว่าและความเข้ากันได้กับแมสสเปกโตรเมทรี (MS)

ขั้นตอนที่ 4 การวิเคราะห์ข้อมูล

มวลที่แตกต่างกันซึ่งสังเกตได้ในชิ้นส่วนที่แตกแยกซึ่งมีฝาปิด m7GpppG ตรงกันข้ามกับที่มีไดฟอสเฟต ไตรฟอสเฟต หรือ G cap ที่ไม่ได้รับเมทิลเลต (GpppG) ช่วยให้ระบุตัวตนได้ง่ายขึ้นและช่วยให้สามารถประมาณประสิทธิภาพในการปิดฝาได้

กรณีการวิเคราะห์ประสิทธิภาพการกำหนดขีดจำกัดด้วย LC–MS

Yaohai-Bio Pharma ได้พัฒนาวิธีการที่มีประสิทธิภาพสำหรับการวิเคราะห์ประสิทธิภาพการปิดฝา mRNA ตั้งแต่การออกแบบเฝือกโอลิโกนิวคลีโอไทด์ (โพรบ) การแตกแยกของ RNase H, IP-RP-HPLC/LC-MS ไปจนถึงการวิเคราะห์ข้อมูล

图片 1

โครมาโตกราฟีไอออนทั้งหมด (ซ้าย) และสเปกตรัมมวลสเปรย์ด้วยไฟฟ้า (ขวา) ของชิ้นส่วนของรอยแยก 5'end

กดรับใบเสนอราคา

ติดต่อเรา