mRNA ได้รับการยอมรับถึงความไม่แน่นอนโดยธรรมชาติ และไวต่อการแตกตัวเมื่อมีปัจจัยภายนอก โดยเฉพาะอย่างยิ่งในระหว่างกระบวนการถอดรหัสในหลอดทดลอง (IVT) และกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ ซึ่งนิวเคลียสที่มีอยู่ทุกหนทุกแห่งก่อให้เกิดความท้าทาย การประเมินความสมบูรณ์ของ mRNA เป็นสิ่งสำคัญในการพัฒนายาที่ใช้ mRNA ในภายหลัง เพื่อให้มั่นใจในทั้งความปลอดภัยและความพร้อมของผลิตภัณฑ์
Yaohai-BioPharma ให้บริการทดสอบความสมบูรณ์ของ mRNA อย่างครอบคลุม โดยใช้วิธีการต่างๆ เช่น agarose gel electrophoresis (AGE), capillary electrophoresis (CEG) และโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) ซึ่งปฏิบัติตามมาตรฐานคุณภาพที่เข้มงวดสำหรับทั้งการวิจัยและการทดลองทางคลินิก
ตามการพิจารณาด้านกฎระเบียบของ WHO “ความสมบูรณ์ของโครงสร้างของ mRNA ถือเป็นคุณลักษณะด้านคุณภาพที่สำคัญสำหรับการปล่อย mRNA ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีการควบคุมเพื่อความสมบูรณ์ของ mRNA, เปอร์เซ็นต์ของ mRNA ที่สมบูรณ์, เปอร์เซ็นต์ของชิ้นส่วนของ mRNA และอื่นๆ”
การวิเคราะห์ |
วิธีการ |
ความสมบูรณ์ของ mRNA |
Aจีอี, อะกาโรสgเอลอิเล็กโตรโฟเรซิส |
CGE-LIF, อิเล็กโตรโฟรีซิสเจลแบบคาปิลลารีพร้อมการตรวจจับการเรืองแสงที่เกิดจากแสง |
Agarose gel electrophoresis เป็นเทคนิคที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการประเมินความสมบูรณ์ของ RNA ทั้งหมด ซึ่งเกี่ยวข้องกับการเรียกใช้ตัวอย่าง RNA บนเจลอะกาโรสที่ทำให้เสียสภาพ ซึ่งเปื้อนด้วยเอทิเดียมโบรไมด์หรือ SYBR Green เจลแปลงสภาพที่ประกอบด้วยอะกาโรส ช่วยให้แยก RNA ได้ง่ายขึ้นตามขนาดเมื่อใช้กระแสไฟฟ้า เมื่อ RNA ที่มีประจุลบเคลื่อนไปยังปลายด้านบวกของเจล ชิ้นส่วนที่มีขนาดเล็กจะเคลื่อนที่เร็วขึ้น ส่งผลให้มีการจัดเรียงโมเลกุล RNA ตามขนาด
Capillary gel electrophoresis (CGE) ถือเป็นแนวทางการวิเคราะห์ที่มีความละเอียดสูงสำหรับการวัดความสมบูรณ์ของโมเลกุล RNA ตามความยาว การประเมินนี้มีความสำคัญต่อการประกันคุณภาพ ความเข้าใจด้านประสิทธิภาพ และการเพิ่มประสิทธิภาพของกระบวนการผลิต เช่นเดียวกับ agarose gel electrophoresis CGE ใช้กระแสไฟฟ้าเพื่อแยกชิ้นส่วน RNA ตามประจุและขนาด ใน CGE เส้นเลือดฝอยจะถูกเติมด้วยเมทริกซ์เจลสำหรับการแยกที่ผสมด้วยสีย้อมเรืองแสง การเคลื่อนที่ของ RNA ไปตามเส้นเลือดฝอยขึ้นอยู่กับขนาดของมัน และการตรวจจับทำได้โดยใช้เครื่องตรวจจับรังสีอัลตราไวโอเลต (UV) หรือเครื่องเรืองแสงที่เกิดจากแสง (LIF)