Upptäcka hemligheterna bakom högkvalitativ plasmidextraktion

Extraktion av plasmider är avgörande för forskare. Som generbärare är plasmider viktiga inom vaccinforskning och genterapi, där kvalitet spelar en stor roll. Nyckelfaktorer för kvalitet inkluderar superkolvad proportion och endotoxininnehåll. Regler varierar: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, med <5% linjär/öppen-cirkulär DNA. Kunder föredrar ofta ≥95% superkolvad. Endotoxinivåer är: forskning (>50 EU/µg), transfektion (<50 EU/µg) och endotoxinfritt (<0.1 EU/µg).

Superkolvat Plasmid DNA

Plasmider från Escherichia coli omfattar superkolvad (SC), öppen-cirkulär (OC) och linjär (L) DNA. En hög SC-proportion förbättrar transfektions-effektiviteten och expression. Till exempel är transfektionen av en 85.45% SC-plasmid 2.5x högre, och HGF-expressionen av en 93.28% SC-plasmid 1.8x högre, vilket bekräftar SC DNAs överlägsenhet.

Öppet-cirkulärt DNA: När en av stranderna i dubbelspiralstrukturerat DNA bryts, blir superdelestrukturen lösare och bildar ett öppet-cirkulärt plasmid med större volym som migrerar långsammast under elektrofores och placeras högst upp.

Linjärt DNA: När båda stranderna av plasmid-DNA bryts bildas en linjär struktur med relativt mindre volym som migrerar snabbare än öppet-cirkulärt DNA men långsammare än superdelestrukturerat DNA, placerad på andra positionen.

Superdelestrukturerat DNA: De två helixarna kringlar sig runt varandra och viktar samman till en superdelestruktur baserad på DNA-helixen. Den har den minsta volymen och migrerar snabbast under elektrofores, placerad längst ner.

Kvantitativ analys av superdeleproportion

Laboratorier använder agarosgelelektrofores (AGE) och Gel-Pro Analyzer för att bedöma proportionen av superdelestrukturerat DNA via elektroforesbilder. En bild visar 97,539% SC DNA, medan en annan visar 63,833% SC och 36,167% OC DNA (linjärt DNA är inte synligt).

Detta hemlighet bakom endotoxiner i plasmider

Endotoxin är en komponent i den yttre lagren av cellväggen hos Gram-negativa bakterier, som släpps ut efter bakteriell död eller lysning och innehåller toksikt lipopolysaccharid A. Under plasmidextraktion går endotoxin in i lösningen, vilket påverkar transfections-effektiviteten och utlöser icke-specifika immunsvar, vilket kan leda till falska positiva resultat i experimenten.

Kvantitativ och kvalitativ analys av endotoxin

Limulus amebocyte lysat (LAL)-testet upptäcker endotoxin via agglutination med 2-keto-3-deoksyoktonsyra (KDO) i lipopolysacchariden (LPS). Det är kvalitativt och semi-kvantitativt och indikerar närvaron av endotoxin genom koagulation eller färgförändring när det blandas med prover.

Yaohai Bio-Pharma erbjuder endotoxinfria superkorda plasmider. Att subkontraktiera till Yaohai förbättrar transfections- och expressions-effektiviteten. Levererade plasmider har ≥95% SC-proportion (genomsnittligt 85%±10%) och endotoxinnivåer ≤0,1, ≤0,01 eller ≤0,005 EU/μg.

Vi söker också aktivt globala partnerschaft med institutioner eller enskilda personer. Vi erbjuder den mest konkurrenskraftiga ersättningen inom branschen. Om du har några frågor, tveka inte att kontakta oss: [email protected]