Rekombinant proteinproduktion: Konstruerade E. coli-stammar

Escherichia coli (E. coli) har spelat en betydande roll i framställningen av rekombinanta proteiner i den biofarmaceutiska industrin, och tjänar som den första expressionsvektorn för tillverkning av biologisk medicin. E. coli har snabb tillväxt, bekväm genetisk manipulation och snabb syntes av rekombinanta proteiner, bland andra fördelar. Omfattande modifieringar har gjort E. coli till ett optimalt val för proteinuttryck, vilket leder till utformningen av olika konstruerade stammar av E. coli.

Yaohai Bio-Pharma specialiserar sig på att tillhandahålla outsourcingtjänster för jäsning, rening, formuleringsprocessutveckling och produktion av en serie bioläkemedel som använder E. coli-expressionssystem. När det gäller den omfattande erfarenheten av Yaohai, sammanfattade vi att fyra vanliga E. coli-stammar används för rekombinant proteinproduktion och deras egenskaper.

BL 21-stam

Härledd från E. coli B-linjen, BL21-stammen saknar Lon-proteas och yttre membranproteas OmpT. Lon-proteas bryter primärt ned exogena proteiner, medan OmpT huvudsakligen bryter ner extracellulära matrisproteiner. Frånvaron av dessa två nyckelproteaser kan effektivt förhindra nedbrytningen av rekombinanta proteiner.

Origami-stam

Origami-stam, ett derivat av E. coli K-12, har mutationer i tioredoxinreduktas och glutationreduktas, vilket underlättar bildandet av korrekt vikta proteiner som innehåller disulfidbindningar och förbättrar proteinlösligheten. Origami-stammen, inklusive Origami, Origami 2 och Origami B, är lämpliga för uttryck av aktiva proteiner som innehåller disulfidbindningar.

Blanda stam

SHuffle-stam uttrycker konstitutivt disulfidbindningsisomeraset DsbC i cytoplasman, vilket främjar bildandet av korrekta disulfidbindningar i oxiderade proteiner. Det fungerar också som en molekylär chaperon för proteinveckning, vilket hjälper till att bilda den korrekta konformationen.

Rosetta-stam

Rosetta-stammen kompletterar E. coli med tRNA som motsvarar sällsynta kodon, i syfte att förbättra expressionsnivån av exogena gener, särskilt eukaryota gener, i prokaryota system. Härledd från BL21 och bär den kloramfenikolresistenta pRARE-plasmiden, kompletterar den sex tRNA som motsvarar sällsynta kodon (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC och GGA) som ursprungligen saknades i E. coli, vilket ger ett mer "universellt" proteinuttryck.

Slutsats

De tre huvudfaktorerna för framgångsrik produktion av rekombinanta proteiner är värden, vektorn och odlingsbetingelserna. Baserat på en förståelse av de fysikalisk-kemiska egenskaperna hos det rekombinanta proteinet, de unika fördelarna med varje stam och de specifika behoven av experimentet, bör den mest lämpliga värden väljas. Dessutom bör faktorer som plasmidvektorer, temperatur och inducerare optimeras för att förbättra proteinuttrycket.

Yaohai Bio-Pharma söker också aktivt efter institutionella eller individuella globala partners och erbjuder den mest konkurrenskraftiga ersättningen i branschen. Om du har några frågor är du välkommen att kontakta oss: [email protected]