Rekombinant Proteinproduktion: Tekniska E. coli-stryper

Escherichia coli (E. coli) har spelat en betydande roll i produktionen av rekombinanta proteiner inom bioteknologifarmaceutiska industrier, och har fungerat som den första uttrycksvektorn för tillverkning av biologisk medicin. E. coli har fördelar som snabb tillväxt, bekvämlig genmanipulation och hastig syntes av rekombinanta proteiner. Omfattande modifieringar har gjort E. coli till en optimal val för proteinettryck, vilket har lett till utformningen av olika tekniska stammar av E. coli.

Yaohai Bio-Pharma specialiserar sig på att erbjuda kompletta utpacknings tjänster för färdering, reningsprocessutveckling och formuleringsproduktion av en rad bioteknologifarmaceutiska produkter med hjälp av E. coli-uttryckssystem. Med hänsyn till Yaohaıs omfattande erfarenhet har vi sammanfattat att fyra vanliga E. coli-stammen används för rekombinant proteintillverkning och deras egenskaper.

BL 21 stam

Avledad från E. coli B-linjen saknar BL21-stammen Lon-proteas och yttre membranproteas OmpT. Lon-proteas bryter ned främst exogena proteiner, medan OmpT huvudsakligen bryter ner extracellulära matrisproteiner. Närvaron av dessa två nyckelproteaser kan effektivt förhindra degradationsprocessen av rekombinanta proteiner.

Origami-stammen

Origami-stammen, en avledning av E. coli K-12, har mutationer i tioridoksinreduktas och glutationreduktas, vilka underlättar bildningen av korrekt vikade proteiner som innehåller disulfidbindningar och förbättrar proteinsolubilitet. Origami-stammen, inklusive Origami, Origami 2 och Origami B, är lämpliga för expression av aktiva proteiner som innehåller disulfidbindningar.

SHuffle-stammen

SHuffle-släkten uttrycker konstitutionellt disulfidbindningsisomeraset DsbC i cytoplasman, vilket främjar bildandet av korrekta disulfidbindningar i oxidiserade proteiner. Den fungerar också som en molekylär chaperon för proteinvikning, och hjälper till att bilda den korrekta konformationen.

Rosetta-släkten

Rosetta-släkten kompletterar E. coli med tRNAs som motsvarar sällsynta kodoner, med målet att förbättra uttrycksnivån av exogena gener, speciellt eukaryotiska gener, i prokaryotiska system. Avledad från BL21 och bärande på chloramfenikolresistenta pRARE-plasmiden, kompletterar den sex tRNAs som motsvarar sällsynta kodoner (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC och GGA) som ursprungligen saknas i E. coli, vilket ger ett mer "universellt" proteinuttryck.

Slutsats

De tre huvudsakliga faktorerna för framgångsrik produktion av rekombinant proteiner är värdorganismen, vektor och kulturförhållanden. Utifrån en förståelse av de fysikokemiska egenskaperna hos det rekombinanta proteinet, de unika fördelarna med varje streck och de specifika behoven i experimentet bör den mest lämpliga värdorganismen väljas. Dessutom bör faktorer som plasmidvektorer, temperatur och inducerare optimeras för att förbättra proteinetableringen.

Yaohai Bio-Pharma söker också aktivt efter globala partner, både institutioner och enskilda personer, och erbjuder den mest konkurrenskraftiga ersättningen i branschen. Om du har några frågor, tveka inte att kontakta oss: [email protected]