Kvalitetskontroll och tillämpningar av rekombinanta proteiner

Kvalitetskontroll av rekombinanta proteiner är avgörande för tillförlitligheten och reproducerbarheten av experimentella data. Varje steg, från projektdesign till produktionsprocess, kräver strikta kvalitetskontrollstrategier.

Kvalitetskontrollstrategier

Industrisektorn följer strikta standardförfaranden, medan det akademiska samfundet behöver förbättra yrkeskunskapen för att förbättra datareproducerbarheten. Proteiner med specifika biologiska tillämpningar eller biokemiska egenskaper kräver skräddarsydda kvalitetskontrollstrategier (QC).

Utmanande exempel och lösningar

Yaohai Bio-Pharma har lång erfarenhet av rekombinant proteinproduktion och rening, tillsammans med ett team av experter, som säkerställer att din proteinproduktion slutförs med hög renhet. Med hjälp av vår erfarenhet från hundratals projekt, sammanfattar Yaohai vänligt hur man optimerar proteinrening.

Nukleinsyrabindande proteiner: Nukleinsyraborttagningssteg, såsom nukleaser eller PEI-utfällning, är nödvändiga. A260nm/A280nm-förhållandet övervakas för att detektera nukleinsyrakontamination.

Mus Ferritin Heavy Chain 1 för cryo-EM: Reningsstegen måste optimeras och nukleaser måste tillsättas för att minska förhållandet A260nm/A280nm och säkerställa proteinrenheten.

Chimärt protein humant dsRBEC: Celllys använder en buffert som innehåller urea, följt av återveckning på kolumnen för att erhålla funktionellt aktiva proteiner.

Proteiner som binder tvåvärda katjoner: Specifika tvåvärda katjoner måste tillsättas under expression och rening, och kelatbildare bör undvikas.

Järn-svavelproteiner: Imidazol bör undvikas för att förhindra störningar av [2Fe ± 2S]-klustret, vilket säkerställer korrekt proteinveckning och funktion.

Lösligt fragment av LLT1: Mutant design optimerar disulfidbindningsbildning och proteinveckning, vilket resulterar i stabila proteiner med hög avkastning.

CLK1 Kinas Kristallisation: Samuttryck med λ-fosfatas tar bort fosfater från fosforyleringsställen, och storleksexklusionskromatografi (SEC) och anjonbyteskromatografi används för att erhålla homogen CLK1 utan heterogen fosforylering.

Proteiner för antigenanvändning: Renhetsbedömning är nödvändig för att undvika kontaminering med mycket immunogena proteiner. För strukturella epitopantikroppar måste den tredimensionella konformationen av antigenet bibehållas.

Aggregationsbenägna proteiner: Strategier som screening av olika stammar och sänkning av odlingstemperaturer används för att begränsa aggregationsproblem, och strategier för snabb rening utformas.

Avlägsnande av endotoxin: Metoder som positiv laddningskromatografi och polykatjonligandaffinitetskromatografi tar bort endotoxiner, vilket säkerställer att LPS-nivåerna ligger under tillämpningsgränserna.

Proteinkomplex: Subenheter uttrycks separat och sätts samman in vitro eller samuttrycks för att bilda funktionella komplex. Komplex integritet utvärderas genom homogenitet och molmassa.

Slutsats

Proteinproduktion börjar med strategisk design, med hänsyn till biokemiska egenskaper och tillämpningar. Under expression, rening och QC optimeras förhållanden och metoder för stabilitet, icke-aggregation och naturligt tillstånd. Renade proteiner tjänar olika nedströms användningar, som biofysisk karakterisering.

Yaohai Bio-Pharma söker också aktivt efter institutionella eller individuella globala partners och erbjuder den mest konkurrenskraftiga ersättningen i branschen. Om du har några frågor är du välkommen att kontakta oss: [email protected]