Kvalitetskontroll och tillämpningar av rekombinant proteiner

Kvalitetskontroll av rekombinanta protein är avgörande för pålitligheten och reproducerbarheten av experimentella data. Varje steg, från projektutformning till produktionssprocesser, kräver strikta kvalitetskontrollstrategier.

Kvalitetskontrollstrategier

Den industriella sektorn följer strikta standardarbetsmetoder, medan den akademiska gemenskapen behöver förbättra sitt yrkeskunskapsnivå för att förbättra datans reproducerbarhet. Protein med specifika biologiska tillämpningar eller bio kemiska egenskaper kräver anpassade kvalitetskontroll (QC) strategier.

Utmanande exempel och lösningar

Yaohai Bio-Pharma har omfattande erfarenhet av produktion och renaturering av rekombinant protein, kombinerat med ett team av experter, vilket garanterar att din proteinformering utförs med hög renhet. Genom att utnyttja vår erfarenhet från hundratals projekt sammanfattar Yaohai hur man optimerar proteinformering.

Nukleinsyror-bindande protein: Steg för borttagning av nukleinsyror, som nukleaser eller PEI-nedfallning, är nödvändiga. Förhållandet A260nm/A280nm övervakas för att upptäcka nukleinsyror kontaminering.

Mus Ferritin Tyngre Kedja 1 för cryo-EM: Reningsstegen måste optimeras, och nukleaser måste läggas till för att minska förhållandet A260nm/A280nm och säkerställa proteinpureteten.

Kimeraprotein MänniskodsRBEC: Celllysys använder en buffer som innehåller urea, följt av kolumnrefaldning för att få funktionsaktiva proteiner.

Proteiner som Binder Divalenta Kationer: Specifika divalentakationer måste läggas till under expression och reningsprocessen, och chelationsmedel bör undvikas.

Järn-Sulfur Proteiner: Imidazol bör undvikas för att förhindra störning av [2Fe ± 2S]-klustret och säkerställa korrekt proteinveckling och funktion.

Lös Fragment av LLT1: Mutantdesignet optimiserar bildningen av disulfidbindningar och proteinvikning, vilket resulterar i stabila och höguppgiftsproteiner.

CLK1-Kinaserkristallisation: Samexprimering med λ-fosfatase tar bort fosfater från fosporyleringsplatser, och storleksexklusionskromatografi (SEC) och anionsbytekromatografi används för att få homogen CLK1 utan heterogent fosporylering.

Proteiner för antigenanvändning: Renhetsbedömning är nödvändig för att undvika kontaminering med höggradigt immunogena proteiner. För strukturella epitopantikroppar måste antigens tre-dimensionella konformation bibehållas.

Aggregeringsbenägna proteiner: Strategier som skärning av olika stammar och minskning av odlingstemperaturen används för att begränsa aggregeringsproblem, och snabba reningsstrategier utformas.

Endotoxinborttagning: Metoder som positivt laddad kromatografi och polycationligandaffinitetskromatografi tar bort endotoxiner, vilket säkerställer att LPS-nivåerna är under tillämpningsgränserna.

Proteinkomplexer: Underenheter uttrycks separat och sammansätts in vitro eller co-uttrycks för att bildas till funktionsdugliga komplex. Komplexets integritet utvärderas genom homogenitet och molmassa.

Slutsats

Produktion av protein börjar med strategisk design, där man tar hänsyn till biokemiska egenskaper och tillämpningar. Under uttryck, renaturering och kvalitetskontroll optimeras villkoren och metoderna för stabilitet, icke-aggregation och nativt tillstånd. Renatuerade proteiner används för olika efterföljande tillämpningar, som biofysisk karaktärisering.

Yaohai Bio-Pharma söker också aktivt efter globala partner, både institutioner och enskilda personer, och erbjuder den mest konkurrenskraftiga ersättningen i branschen. Om du har några frågor, tveka inte att kontakta oss: [email protected]