Tillverkningsprocessen av eGFP mRNA

Produktionen av eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA innebär en serie molekylbiologiska tekniker för att generera ett fungerande RNA-molekyl som kodar för expressionen av eGFP. Inom området eGFP mRNA har Yaohai Bio-Pharma samlat omfattande erfarenhet av att uppfylla de specifika behoven hos våra kunder. Genom att utnyttja vår erfarenhet har vi sammanställt processflödet för produktionen av EGFP mRNA.

1. Kloning av eGFP-genen : Detta är för att få tag på den gensekvens som kodar för eGFP. Denna gen klonas vanligtvis från en befintlig plasmidvektor eller syntetiseras artificiellt baserat på den kända nukleotidsekvensen. Den klonade genen verifieras sedan genom sekvensering för att säkerställa noggrannhet.
2. Genoptimering för expression : För optimal uttryck i det målsystemet (t.ex. mammalceller, bakterier eller in vitro transkriptionssystem) kan eGFP-genen optimeras med hjälp av kodonoptimisering. Detta innebär att sällsynta kodoner i den ursprungliga sekvensen ersätts med vanligare i värdorganismen, vilket ökar chanserna för effektiv transkription.
3. In vitro Förberedelse av transkriptionsmall : När den optimerade genen är klar integreras den i en lämplig vektor, ofta en plasmid, som innehåller reglerande element nödvändiga för transkription (t.ex. en promotorsekvens). Denna plasmid används som mall för in vitro transkription.
4. In vitro Transkription : Med hjälp av det förberedda plasmidtemplet utförs in vitro transkription för att syntetisera eGFP mRNA. Denna process innefattar användning av RNA polymeras enzym, vilka känner igen promotorsekvensen och initierar transkriptionen, producerar en komplementär RNA-strand till DNA-templet. Beroende på önskat syfte kan mRNA kapas, polyadenylas och/eller modifieras för att förbättra stabilitet och translations-effektivitet.
5. Renning och Kvalitetskontroll : Den syntetiserade eGFP mRNA renas sedan för att ta bort alla föroreningar, inklusive DNA, protein och fria nukleotider. Reningsmetoder kan omfatta gel elektrofores, kolumnkromatografi eller partikelbaserad separering. Efter renningen analyseras mRNA:n på kvalitet, inklusive koncentration, renhet och integritet, med tekniker som UV-Vis spektrofotometri och gel elektrofores.
6. Lagring och Leverans : Den renade eGFP-mRNA lagras vanligtvis vid låga temperaturer för att bibehålla stabilitet. För experimentell användning kan mRNA levereras till celler med olika metoder, inklusive elektroporation, lipofektion eller virala vektorer, beroende på den specifika tillämpningen och typen av målcell.
7. Uttryck och Verifiering : När mRNA för eGFP finns inne i cellen översätts den till det förstärkta gröna fluorescerande proteinet, vilket kan visualiseras med hjälp av fluorescensmikroskopi. Detta gör det möjligt att verifiera framgångsrik mRNA-produktion, leverans och uttryck.

Sammanfattningsvis omfattar produktionen av eGFP-mRNA kloning av genen, optimering för uttryck, förberedelse av en transkriptionstemplat in vitro, utförandet av transkriptionsreaktionen, renad av den resulterande mRNA:n och slutligen leverans till celler för uttryck och verifiering.

Vi söker också aktivt globala partnerschaft med institutioner eller enskilda personer. Vi erbjuder den mest konkurrenskraftiga ersättningen inom branschen. Om du har några frågor, tveka inte att kontakta oss: [email protected]