Tillverkningsprocess för eGFP mRNA Sverige

Produktionen av eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA involverar en serie molekylärbiologiska tekniker för att generera en funktionell RNA-molekyl som kodar för uttrycket av eGFP. Inom området eGFP mRNA har Yaohai Bio-Pharma samlat på sig omfattande erfarenhet av att tillgodose kundernas specifika behov. Med vår erfarenhet har vi syntetiserat processflödet för att producera EGFP-mRNA.

1. Kloning av eGFP-genen: Det för att erhålla gensekvensen som kodar för eGFP. Denna gen klonas typiskt från en redan existerande plasmidvektor eller syntetiseras artificiellt baserat på den kända nukleotidsekvensen. Den klonade genen verifieras sedan genom sekvensering för att säkerställa noggrannhet.
2. Genoptimering för uttryck: För optimalt uttryck i målsystemet (t.ex. däggdjursceller, bakterier eller in vitro-transkriptionssystem) kan eGFP-genen genomgå kodonoptimering. Detta innebär att sällsynta kodon i den ursprungliga sekvensen ersätts med mer frekvent använda kodon i värdorganismen, vilket ökar chanserna för effektiv translation.
3. In vitro Förberedelse av transkriptionsmall: När den optimerade genen är klar, inkorporeras den i en lämplig vektor, ofta en plasmid, som innehåller regulatoriska element som är nödvändiga för transkription (t.ex. en promotorsekvens). Denna plasmid tjänar som en mall för in vitro-transkription.
4. In vitro Transkription: Med användning av den preparerade plasmidmallen utförs in vitro-transkription för att syntetisera eGFP-mRNA. Denna process involverar användningen av RNA-polymerasenzymer, som känner igen promotorsekvensen och initierar transkription, vilket producerar en komplementär RNA-sträng till DNA-mallen. Beroende på den önskade applikationen kan mRNA vara kapslad, polyadenylerad och/eller modifierad för att öka stabiliteten och translationseffektiviteten.
5. Rening och kvalitetskontroll: Det syntetiserade eGFP-mRNA:t renas sedan för att avlägsna alla föroreningar, inklusive DNA, proteiner och fria nukleotider. Reningsmetoder kan innefatta gelelektrofores, kolonnkromatografi eller pärlbaserad separation. Efter rening analyseras mRNA för kvalitet, inklusive koncentration, renhet och integritet, med hjälp av tekniker som UV-Vis-spektrofotometri och gelelektrofores.
6. Lagring och leverans: Det renade eGFP-mRNA:t lagras vanligtvis vid låga temperaturer för att bibehålla stabilitet. För experimentell användning kan mRNA:t levereras till celler med hjälp av olika metoder, inklusive elektroporering, lipofektion eller virala vektorer, beroende på den specifika applikationen och målcellstypen.
7. Uttryck och verifiering: Väl inne i cellen översätts eGFP-mRNA:t till det förstärkta gröna fluorescerande proteinet, som kan visualiseras med fluorescensmikroskopi. Detta möjliggör verifiering av framgångsrik mRNA-produktion, leverans och uttryck.

Sammanfattningsvis involverar produktionen av eGFP-mRNA kloning av genen, optimering av den för uttryck, förberedelse av en in vitro-transkriptionsmall, utförande av transkriptionsreaktionen, rening av det resulterande mRNA:t och slutligen leverans av det till celler för uttryck och verifiering.

Vi söker också aktivt institutionella eller individuella globala partners. Vi erbjuder den mest konkurrenskraftiga ersättningen i branschen. Om du har några frågor är du välkommen att kontakta oss: [email protected]