Plasmide: een klein circulair DNA-molecuul met groot potentieel

Plasmiden, kleine circulaire DNA-moleculen, dienen als essentiële vectoren voor DNA-recombinatie in moleculair biologisch onderzoek en gentherapie. De opbrengst en kwaliteit van plasmiden zijn cruciaal, waarbij supercoiled-proportie en endotoxinegehalte twee belangrijke factoren zijn die de plasmidekwaliteit beïnvloeden.

Plasmide-subtypen

Plasmiden geëxtraheerd uit Escherichia coli (E. coli) bestaan ​​in verschillende subtypes: supercoiled (SC), open circulaire (OC) en lineaire (L) vormen (Figuur 1). Onder hen vertonen supercoiled plasmiden uitstekende stabiliteit, antigeniciteit en hoge transfectie- en expressie-efficiëntie.

Figuur 1. Schematisch diagram van veelvoorkomende plasmidesubtypen

Bij agarosegelelektroforese van plasmide-DNA is de volgorde van migratiesnelheid: supercoiled DNA, lineair DNA en open circulair DNA (figuur 2).

Figuur 2. Agarosegelelektroforese-migratiepatroon van verschillende plasmidesubtypen

Yaohai Bio-Pharma heeft haar processen en technieken voortdurend verbeterd om ervoor te zorgen dat de supercoiled-proportie van transfectie-grade plasmiden ≥85% is en die van research-grade plasmiden ≥50%. Hieronder volgt een casusdemonstratie (Figuur 3), waarbij agarosegelelektroforese wordt gecombineerd met Gel-Pro Analyzer-software om de supercoiled-proportie te detecteren.

Figuur 3. Resultaten van kwaliteitsinspectie van plasmide supercoiled proportie

endotoxine

Endotoxine, een component van de celwand van Gram-negatieve bacteriën, bestaat voornamelijk uit lipopolysaccharide A (LPS-A) als toxische component. Tijdens plasmide-extractie komt endotoxine vrij in de lysisoplossing, wat de efficiëntie van plasmide-transfectie in cellen ernstig beïnvloedt. Bovendien kan het niet-specifieke immuunreacties in cellen activeren, wat leidt tot vals-positieve resultaten in experimenten.

Yaohai Bio-Pharma hanteert een "non-introduction" en "high removal" benadering, waarbij het gebruik van reagentia en materialen die endotoxine bevatten strikt wordt gecontroleerd tijdens het zuiveringsproces. Het bedrijf heeft ook een efficiënte endotoxineverwijderingsmethode ontwikkeld, die drie niveaus van endotoxinegehalte biedt: ≤0.1 EU/µg, ≤0.01 EU/µg en ≤0.005 EU/µg.

Yaohai Bio-Pharma beschikt over een high-throughput plasmid extractie servicelijn, die in staat is om 1 mg geëxtraheerde plasmiden in slechts één week te leveren. Standaard biedt het meer dan zeven kwaliteitscontrole (QC) tests om de levering van hoogwaardige, hoog-standaard plasmiden vanuit meerdere perspectieven te garanderen.

We zijn ook actief op zoek naar institutionele of individuele mondiale partners. Wij bieden de meest concurrerende verloning in de branche. Als u vragen heeft, neem dan gerust contact met ons op: [email protected]