Plasmid: Een Kleine Circulaire DNA-Molecuul met Groot Potentieel

Plasmiden, kleine circulaire DNA-moleculen, dienen als essentiële vectoren voor DNA-recombinatie in moleculaire biologisch onderzoek en genetherapie. De opbrengst en kwaliteit van plasmiden zijn cruciaal, met de supercoiled verhouding en het endotoxine-inhoud als twee belangrijke factoren die de kwaliteit van plasmiden beïnvloeden.

Subtypen van Plasmiden

Plasmiden die worden geëxtraheerd uit Escherichia coli (E. coli) bestaan in verschillende subtypen: supercoiled (SC), open circulair (OC) en lineair (L) vormen (Figuur 1). Hiervan tonen supercoiled plasmiden uitstekende stabiliteit, antigeniciteit en een hoge transfectie- en expressie-efficiëntie.

Figuur 1. Schematische weergave van de meest voorkomende subtypen van plasmiden

Bij agarose gel elektroforese van plasmid-DNA is de volgorde van migratiesnelheid supercoiled DNA, lineair DNA en open circulair DNA (Figuur 2).

Figuur 2. Migratiepatroon bij agarose gel elektroforese van verschillende subtypen van plasmiden

Yaohai Bio-Pharma heeft continu haar processen en technieken verbeterd om ervoor te zorgen dat het percentage supercoiled plasmiden van transfectiekwaliteit ≥85% is en dat van onderzoekskwaliteit ≥50%. Hieronder volgt een casusdemo (figuur 3), waarbij agarose gel elektroforese wordt gecombineerd met de Gel-Pro Analyzer software om het percentage supercoiled plasmiden te detecteren.

Figuur 3. Kwaliteitscontrole resultaten van het percentage supercoiled plasmiden

Endotoxine

Endotoxine, een component van de celwand van gramnegatieve bacteriën, bestaat voornamelijk uit lipopolysaccharide A (LPS-A) als zijn giftige component. Tijdens het extraheren van plasmiden komt endotoxine vrij in de lyseoplossing, wat ernstig invloed uitoefent op de efficiëntie van plasmidtransfectie in cellen. Daarnaast kan het niet-specifieke immuunreacties in cellen activeren, wat leidt tot valse positieven in experimenten.

Yaohai Bio-Pharma hanteert een "niet-introduceer" en "hoog verwijderen" aanpak, waarbij streng wordt samengewerkt met het gebruik van reagentia en materialen die endotoxine bevatten gedurende het gehele zuiveringsproces. Het bedrijf heeft ook een efficiënte methode voor het verwijderen van endotoxine ontwikkeld, waardoor drie niveaus van endotoxine-inhoud worden aangeboden: ≤0,1 EU/µg, ≤0,01 EU/µg en ≤0,005 EU/µg.

Yaohai Bio-Pharma beschikt over een high-throughput plasmidextractiedienstlijn, in staat om binnen een week 1 mg van geëxtraheerde plasmiden te leveren. Standaard biedt het meer dan zeven kwaliteitscontroles (QC-tests) om ervoor te zorgen dat er vanuit verschillende invalshoeken hoge-kwaliteit, hoogstandaardplasmiden worden afgeleverd.

Wij zoeken ook actief naar instellingen of individuen als wereldwijde partners. Wij bieden de meest concurrerende vergoeding in de industrie. Als u vragen heeft, aarzel dan niet om contact met ons op te nemen: [email protected]