Optimalisatie van het zuiveringsproces voor recombinante humane insuline

De groei van diabetespatiënten heeft de vraag naar insuline de laatste jaren aangewakkerd, maar betaalbare insuline is schaars. Efficiënte, economische insulineproductie is cruciaal. E. coli wordt voornamelijk geproduceerd via Escherichia coli (E. coli) en gist vanwege de snelle groei en lage kosten, maar heeft te maken met complexe downstream-verwerking.

Overzicht van downstream-verwerking:

Het zuiveren van recombinante humane insuline uit E. coli-insluitlichaampjes omvat meerdere stappen, waaronder winning, wassen, oplossen en oxidatie, splitsing, bufferuitwisseling, chromatografische zuivering, precipitatie, renaturatie, enzymatische splitsing en formulering.

Yaohai Bio-Pharma heeft uitgebreide ervaring in de productie en zuivering van recombinante insuline, gecombineerd met een team van experts, die ervoor zorgen dat uw insulineproductie met hoge efficiëntie wordt voltooid. Door gebruik te maken van onze ervaring van honderden projecten, vat Yaohai vriendelijk samen hoe u het downstream zuiveringsproces voor recombinante humane insuline kunt optimaliseren.

Inclusie Lichaamsherstel en wassen:

Cellen worden verstoord met behulp van mechanische methoden (zoals ultrasonicatie, hogedrukhomogenisatie) of lysozymebehandeling, gevolgd door wasbuffers (met ureum, Triton X-100, enz.) om onzuiverheden te verwijderen. Tijdens het wassen moeten parameters worden geoptimaliseerd om de eiwitkwaliteit te garanderen en tegelijkertijd de kosten te beheersen.

Oplosbaarheid en oxidatie van insluitlichamen:

Denatureringsmiddelen met een hoge concentratie (zoals guanidinehydrochloride en ureum) worden gebruikt om insluitlichaampjes op te lossen, waarbij dithiothreitol of β-mercaptoethanol wordt toegevoegd om de vorming van onjuiste disulfidebindingen te voorkomen. De pH en de temperatuur hebben een aanzienlijke invloed op de solubilisatie- en oxidatiereacties.

Splitsing en bufferuitwisseling:

Cyanogen bromide splitsing wordt gebruikt om het N-terminale initiërende aminozuur te verwijderen, maar het brengt toxiciteit en lage specificiteitsproblemen met zich mee. Door dialyse, ultrafiltratie of size exclusion chromatografie verwijdert Buffer exchange schadelijke reagentia ter voorbereiding op volgende bewerkingen.

Chromatografische zuivering en neerslag:

Er worden meerdere chromatografische technieken gebruikt om insuline te zuiveren, waaronder affiniteitschromatografie, ionenuitwisselingschromatografie, reversed-phase chromatografie, hydrofobe interactiechromatografie en size exclusion chromatografie. Precipitatiemethoden, zoals pH-precipitatie en zinkkristallisatie, worden gebruikt om onzuiverheden te verwijderen en eiwitten te concentreren.

Renaturatie:

Het opgeloste eiwit wordt verdund in een renaturatiebuffer om de juiste vorming van disulfidebindingen en eiwitvouwing te bevorderen. Eiwitvouwingvloeistofchromatografie en dialyse zijn ook methoden die worden gebruikt voor renaturatie.

Enzymatische splitsing en formulering:

Trypsine en carboxypeptidase B worden gebruikt om het C-peptide te splitsen, waardoor het actieve insuline-heterodimeer ontstaat. Tot slot worden kristallisatie en lyofilisatie gebruikt om resterende zouten en buffers te verwijderen, waardoor een stabiele formulering wordt bereid. Specifieke additieven (zoals zink en protamine) worden toegevoegd om aan verschillende klinische behoeften te voldoen.

Conclusie:

Downstream-verwerking van insuline van E. coli is complex. De focus van de toekomst zou moeten liggen op het optimaliseren van deze stappen voor efficiënte, economische productie om aan de vraag te voldoen en kosten te verlagen.

Yaohai Bio-Pharma is ook actief op zoek naar institutionele of individuele wereldwijde partners en biedt de meest concurrerende compensatie in de industrie. Als u vragen heeft, neem dan gerust contact met ons op: [email protected]