Optimalisatie van het zuiveringsproces voor recombinant menselijk insuline

In de afgelopen jaren heeft de groei van diabetespatiënten de vraag naar insuline doen toenemen, maar betaalbare insuline is in korte supply. Efficiënte, economische insulineproductie is cruciaal. Hoofdzakelijk geproduceerd via Escherichia coli (E. coli) en gist wegens snelle groei en lage kosten, staat E. coli echter voor complexe downstream-verwerking.

Overzicht van Downstream-Verwerking:

Het zuiveren van recombinant menselijk insuline uit E. coli inclusielichamen omvat meerdere stappen, waaronder herstel, wassen, oplosbaar maken en oxidatie, afsnijden, bufferuitwisseling, chromatografische zuivering, neerslagvorming, renaturalisatie, enzymatische afscheiding en formulering.

Yaohai Bio-Pharma beschikt over uitgebreide ervaring in de productie en zuivering van recombinant insuline, vergezeld door een team van experts, wat ervoor zorgt dat uw insulineproductie met hoge efficiëntie wordt voltooid. Door onze ervaring uit honderden projecten te gebruiken, samenvat Yaohai vriendelijk hoe men het Downstream-Zuiveringsproces voor Recombinant Menselijk Insuline kan optimaliseren.

Inclusielichaamsherstel en -wassen:

Cellen worden verstoord met behulp van mechanische methoden (zoals ultrasoon, hoge-drukhomogenisatie) of lysozymbehandeling, gevolgd door wassbuffer (met ureum, Triton X-100, etc.) om onreinigheden te verwijderen. Tijdens het wassen moeten parameters worden geoptimaliseerd om de proteïne-kwaliteit te waarborgen terwijl kosten onder controle blijven.

Inclusielichaamsoplosbaarheid en oxidatie:

Hoge concentraties ontvouwers (zoals guanidinehydrochloride en ureum) worden gebruikt om inclusielichamen op te lossen, met dithiothreitol of β-mercaptoethanol toegevoegd om de vorming van verkeerde disulfidebindingen te voorkomen. pH en temperatuur hebben een groot effect op de oplossings- en oxidatiereacties.

Kleving en bufferuitwisseling:

Cyanogeenbromide splitsing wordt gebruikt om het N-terminale startaminozuur te verwijderen, maar dit stelt problemen met toxiciteit en lage specifiteit. Door dialyse, ultrafiltratie of grootte-exclusiechromatografie verwijdert bufferwisseling schadelijke reagentia in voorbereiding op volgende operaties.

Chromatografische zuivering en neerslagvorming:

Verschillende chromatografische technieken worden toegepast om insuline te zuiveren, waaronder affiniteitschromatografie, ionenuitwisselingschromatografie, reversed-phase chromatografie, hydrofoob interactie chromatografie en grootte-exclusiechromatografie. Neerslagmethoden zoals pH-neerslag en zinkkristallisatie worden gebruikt om onreinigheden te verwijderen en eiwitten te concentreren.

Renatuuratie:

Het opgeloste eiwit wordt verdild in een renatuuratiebuffer om de juiste vorming van disulfidebindingen en eiwitvouwing te bevorderen. Eiwitvouwingsvloeistofchromatografie en dialyse zijn ook methoden die worden gebruikt voor renatuuratie.

Enzymatische splitsing en formulering:

Trypsine en carboxypeptidase B worden gebruikt om het C-peptide te splitsen, waardoor het actieve insuline-heterodimer ontstaat. Tenslotte worden kristallisatie en lyofilisatie toegepast om residuele zouten en buffers te verwijderen, waarbij een stabiele formulering wordt voorbereid. Specifieke additieven (zoals zink en protamine) worden toegevoegd om verschillende klinische behoeften te voldoen.

Conclusie:

Downstream verwerking van insuline van E. coli is complex. Toekomstige focus moet liggen op het optimaliseren van deze stappen voor efficiënte, economische productie om de vraag te dekken en kosten te verminderen.

Yaohai Bio-Pharma zoekt ook actief naar globale partners, zowel instellingen als individuen, en biedt de meest competitieve vergoeding in de branche. Als u vragen heeft, aarzel dan niet om contact met ons op te nemen: [email protected]