Kwaliteitscontrole en toepassingen van recombinante eiwitten

Kwaliteitscontrole van recombinante eiwitten is cruciaal voor de betrouwbaarheid en reproduceerbaarheid van experimentele data. Elke stap, van projectontwerp tot productieproces, vereist strenge kwaliteitscontrolestrategieën.

Kwaliteitscontrolestrategieën

De industriële sector houdt zich aan strikte standaardwerkprocedures, terwijl de academische gemeenschap professionele kennis moet vergroten om de reproduceerbaarheid van gegevens te verbeteren. Eiwitten met specifieke biologische toepassingen of biochemische kenmerken vereisen op maat gemaakte kwaliteitscontrolestrategieën (QC).

Uitdagende voorbeelden en oplossingen

Yaohai Bio-Pharma kan bogen op uitgebreide ervaring in recombinante eiwitproductie en -zuivering, gecombineerd met een team van experts, die ervoor zorgen dat uw eiwitproductie met hoge zuiverheid wordt voltooid. Door gebruik te maken van onze ervaring van honderden projecten, vat Yaohai vriendelijk samen hoe u eiwitzuivering kunt optimaliseren.

Nucleïnezuurbindende eiwitten: Stappen voor het verwijderen van nucleïnezuur, zoals nucleasen of PEI-precipitatie, zijn noodzakelijk. De A260nm/A280nm-verhouding wordt bewaakt om nucleïnezuurverontreiniging te detecteren.

Muis Ferritin Heavy Chain 1 voor cryo-EM: Zuiveringsstappen moeten worden geoptimaliseerd en nucleasen moeten worden toegevoegd om de A260nm/A280nm-verhouding te verlagen en de zuiverheid van het eiwit te waarborgen.

Chimerisch eiwit menselijk dsRBEC: Bij cellyse wordt gebruikgemaakt van een buffer die ureum bevat, gevolgd door on-column refolding om functioneel actieve eiwitten te verkrijgen.

Eiwitten die divalente kationen binden: Tijdens de expressie en zuivering moeten specifieke tweewaardige kationen worden toegevoegd en moeten chelerende middelen worden vermeden.

IJzer-zwavelproteïnen: Imidazol moet worden vermeden om verstoring van de [2Fe ± 2S]-cluster te voorkomen, waardoor een correcte proteïnevouwing en -functie wordt gegarandeerd.

Oplosbaar fragment van LLT1: Mutantontwerp optimaliseert de vorming van disulfidebindingen en de proteïnevouwing, wat resulteert in stabiele en hoogproductieve proteïnen.

CLK1 Kinase Kristallisatie: Co-expressie met λ-fosfatase verwijdert fosfaten van fosforyleringsplaatsen, en size exclusion chromatografie (SEC) en anion exchange chromatografie worden gebruikt om homogene CLK1 te verkrijgen zonder heterogene fosforylering.

Eiwitten voor antigeengebruik: Zuiverheidsbeoordeling is noodzakelijk om contaminatie met zeer immunogene eiwitten te voorkomen. Voor structurele epitope-antilichamen moet de driedimensionale conformatie van het antigeen behouden blijven.

Aggregatiegevoelige eiwitten: Om aggregatieproblemen te beperken, worden strategieën toegepast zoals het screenen van verschillende stammen en het verlagen van de kweektemperaturen. Ook worden er strategieën voor snelle zuivering ontworpen.

Verwijdering van endotoxinen: Methoden zoals positieve ladingschromatografie en polykationligandaffiniteitschromatografie verwijderen endotoxinen, waardoor de LPS-niveaus onder de toepassingslimieten blijven.

Eiwitcomplexen: Subunits worden afzonderlijk tot expressie gebracht en in vitro geassembleerd of co-geëxprimeerd om functionele complexen te vormen. Complexintegriteit wordt geëvalueerd door homogeniteit en molaire massa.

Conclusie

Eiwitproductie begint met strategisch ontwerp, rekening houdend met biochemische eigenschappen en toepassingen. Tijdens expressie, zuivering en QC worden omstandigheden en methoden geoptimaliseerd voor stabiliteit, niet-aggregatie en oorspronkelijke staat. Gezuiverde eiwitten dienen verschillende downstream-toepassingen, zoals biofysische karakterisering.

Yaohai Bio-Pharma is ook actief op zoek naar institutionele of individuele wereldwijde partners en biedt de meest concurrerende compensatie in de industrie. Als u vragen heeft, neem dan gerust contact met ons op: [email protected]