Membuka Rahsia Penstrakan Plasmid Berkualiti Tinggi

Pengeksakan plasmid adalah perkara penting bagi penyelidik. Sebagai vektor gen, plasmid memainkan peranan penting dalam penyelidikan vakcin dan terapi gen, di mana kualiti adalah faktor utama. Faktor kualiti utama termasuk nisbah supercoiled dan kandungan endotoksin. Peraturan bervariasi: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, dengan <5% DNA linear/bulat-buka. Pelanggan sering mengutamakan ≥95% supercoiled. aras endotoksin adalah: penyelidikan (>50 EU/µg), transfeksi (<50 EU/µg), dan bebas endotoksin (<0.1 EU/µg).

DNA Plasmid Supercoiled

Plasmid daripada Escherichia coli merangkumi DNA supercoiled (SC), bulat-buka (OC), dan linear (L). Nisbah SC yang tinggi meningkatkan kecekapan transfeksi dan ungkapan. Sebagai contoh, transfeksi plasmid 85.45% SC adalah 2.5 kali lebih tinggi, dan ungkapan HGF plasmid 93.28% SC adalah 1.8 kali lebih tinggi, mengesahkan kelebihan DNA SC.

DNA berbentuk bulat terbuka: Apabila satu rantai daripada DNA dua rantai terputus, struktur supercoil menjadi longgar, membentuk plasmid bulat terbuka dengan isipadu yang lebih besar yang bermigrasi paling perlahan semasa elektroforesis dan terletak di atas.

DNA linear: Apabila kedua-dua rantai DNA plasmid terputus, satu struktur linear terbentuk, dengan isipadu yang relatif lebih kecil yang bermigrasi lebih pantas berbanding DNA bulat terbuka tetapi lebih perlahan berbanding DNA supercoil, terletak pada kedudukan kedua.

DNA supercoil: Dua heliks saling bertindih, melintir menjadi struktur supercoil berdasarkan heliks DNA. Ia mempunyai isipadu terkecil dan bermigrasi paling pantas semasa elektroforesis, terletak di bawah.

Analisis Kuantitatif Nisbah Supercoil

Laborator menggunakan elektroforesis gel agarosa (AGE) dan Gel-Pro Analyzer untuk menilai nisbah supercoil melalui imej elektroforesis. Satu imej menunjukkan 97.539% DNA SC, manakala yang lain menunjukkan 63.833% DNA SC dan 36.167% DNA OC (DNA linear tidak nampak).

Rahsia Endotoksin dalam Plasmid

Endotoksin adalah komponen lapisan luar dinding sel bakteria Gram-negatif, yang dilepaskan selepas kematian atau lisistik bakteria, mengandungi lipopolisakarida A yang beracun. Semasa pengekstrakan plasmid, endotoksin memasuki larutan lisistik, mempengaruhi kecekapan transfeksi dan memicu tindak balas imun tidak spesifik, menyebabkan positif palsu dalam eksperimen.

Analisis Kuantitatif dan Kualitatif Endotoksin

Ujian limulus amebosit lisat (LAL) mengesan endotoksin melalui penggumpalan dengan asid 2-keto-3-deoksioktonik (KDO) dalam lipopolisakarida (LPS). Ia adalah kualitatif dan separuh-kuantitatif, menunjukkan kehadiran endotoksin melalui penggumpalan atau perubahan warna apabila dicampur dengan sampel.

Yaohai Bio-Pharma menawarkan plasmid supercoil bebas endotoksin. Mempercayakan kepada Yaohai meningkatkan kecekapan transfeksi dan ungkapan. Plasmid yang disampaikan mempunyai kadar SC ≥95% (purata 85%±10%) dan tahap endotoksin ≤0.1, ≤0.01, atau ≤0.005 EU/μg.

Kami juga aktif mencari rakan global institusi atau perorangan. Kami menawarkan ganti rugi paling kompetitif dalam industri ini. Jika anda ada sebarang soalan, sila rasa percuma untuk menghubungi kami: CRO@yaohaibio.cn