Membuka Kunci Rahsia Pengekstrakan Plasmid Berkualiti Tinggi Malaysia

Pengekstrakan plasmid adalah penting untuk penyelidik. Sebagai vektor gen, plasmid adalah penting dalam penyelidikan vaksin dan terapi gen, di mana kualiti penting. Faktor kualiti utama termasuk perkadaran supercoiled dan kandungan endotoksin. Peraturan berbeza-beza: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, dengan <5% DNA linear/bulatan terbuka. Pelanggan selalunya lebih suka ≥95% supercoiled. Tahap endotoksin ialah: penyelidikan (>50 EU/µg), pemindahan (<50 EU/µg), dan bebas endotoksin (<0.1 EU/µg).

DNA Plasmid Supercoiled

Plasmid daripada Escherichia coli termasuk supercoiled (SC), open-circular (OC), dan linear (L) DNA. Perkadaran SC yang tinggi meningkatkan kecekapan dan ekspresi pemindahan. Sebagai contoh, pemindahan plasmid SC 85.45% adalah 2.5x lebih tinggi, dan ekspresi HGF plasmid SC 93.28% adalah 1.8x lebih tinggi, mengesahkan keunggulan DNA SC.

DNA bulatan terbuka: Apabila satu untai DNA untai dua pecah, struktur bergelung besar menjadi longgar, membentuk plasmid bulat terbuka dengan isipadu yang lebih besar yang berhijrah paling perlahan semasa elektroforesis dan diletakkan di bahagian atas.

DNA Linear: Apabila kedua-dua helai DNA plasmid pecah, struktur linear terbentuk, dengan isipadu yang agak kecil yang berhijrah lebih cepat daripada DNA bulat terbuka tetapi lebih perlahan daripada DNA bergelung besar, diposisikan kedua.

DNA Supercoiled: Dua heliks bercantum, berpusing menjadi struktur supercoiled berdasarkan heliks DNA. Ia mempunyai isipadu terkecil dan berhijrah paling cepat semasa elektroforesis, diletakkan di bahagian bawah.

Analisis Kuantitatif Perkadaran Supercoiled

Makmal menggunakan elektroforesis gel agarose (AGE) dan Penganalisis Gel-Pro untuk menilai perkadaran supercoiled melalui imej elektroforesis. Satu imej menunjukkan 97.539% SC DNA, manakala satu lagi menunjukkan 63.833% SC dan 36.167% OC DNA (linear DNA tidak kelihatan).

Rahsia Endotoksin dalam Plasmid

Endotoksin ialah komponen lapisan luar dinding sel bakteria Gram-negatif, dilepaskan selepas kematian atau lisis bakteria, mengandungi lipopolisakarida A toksik. Semasa pengekstrakan plasmid, endotoksin memasuki larutan lisis, menjejaskan kecekapan pemindahan dan mencetuskan tindak balas imun yang tidak spesifik, yang memimpin kepada positif palsu dalam eksperimen.

Analisis Kuantitatif dan Kualitatif Endotoksin

Ujian Limulus amebocyte lysate (LAL) mengesan endotoksin melalui aglutinasi dengan asid 2-keto-3-deoxyoctonic (KDO) dalam lipopolysaccharide (LPS). Ia bersifat kualitatif dan separa kuantitatif, menunjukkan kehadiran endotoksin melalui pembekuan atau perubahan warna apabila dicampur dengan sampel.

Yaohai Bio-Pharma menawarkan plasmid supergegelung bebas endotoksin. Penyumberan luar kepada Yaohai meningkatkan kecekapan pemindahan dan ekspresi. Plasmid yang dihantar mempunyai perkadaran SC ≥95% (purata 85%±10%) dan tahap endotoksin ≤0.1, ≤0.01, atau ≤0.005 EU/μg.

Kami juga sedang giat mencari rakan kongsi global institusi atau individu. Kami menawarkan pampasan yang paling kompetitif dalam industri. Jika anda mempunyai sebarang pertanyaan, sila hubungi kami: [email protected]