Pengeluaran Protein Rekombinan: Kejuruteraan E. coli Strain

Escherichia coli (E. coli) telah memainkan peranan penting dalam menghasilkan protein rekombinan dalam industri biofarmaseutikal, berfungsi sebagai vektor ekspresi pertama untuk pembuatan ubat biologi. E. coli mempunyai pertumbuhan pesat, manipulasi genetik yang mudah, dan sintesis pantas protein rekombinan, antara kelebihan lain. Pengubahsuaian yang meluas telah menjadikan E. coli pilihan optimum untuk ekspresi protein, yang membawa kepada reka bentuk pelbagai strain kejuruteraan E. coli.

Yaohai Bio-Pharma pakar dalam menyediakan perkhidmatan penyumberan luar sehenti untuk penapaian, penulenan, pembangunan proses perumusan dan pengeluaran siri biofarmaseutikal menggunakan sistem ekspresi E. coli. Mengenai pengalaman luas Yaohai, kami merumuskan bahawa empat strain E. coli biasa digunakan untuk penghasilan protein rekombinan dan ciri-cirinya.

terikan BL 21

Berasal daripada keturunan E. coli B, strain BL21 tidak mempunyai protease Lon dan protease membran luar OmpT. Lon protease terutamanya merendahkan protein eksogen, manakala OmpT terutamanya merendahkan protein matriks ekstraselular. Ketiadaan dua protease utama ini boleh menghalang degradasi protein rekombinan dengan berkesan.

Ketegangan origami

Strain origami, terbitan E. coli K-12, mempunyai mutasi dalam thioredoxin reductase dan glutathione reductase, yang memudahkan pembentukan protein terlipat dengan betul yang mengandungi ikatan disulfida dan meningkatkan keterlarutan protein. Strain Origami, termasuk Origami, Origami 2, dan Origami B, sesuai untuk ekspresi protein aktif yang mengandungi ikatan disulfida.

Kocok ketegangan

Strain shuffle secara konstitutif menyatakan ikatan disulfida isomerase DsbC dalam sitoplasma, menggalakkan pembentukan ikatan disulfida yang betul dalam protein teroksida. Ia juga berfungsi sebagai pendamping molekul untuk lipatan protein, membantu dalam pembentukan konformasi yang betul.

Ketegangan Rosetta

Strain Rosetta menambah E. coli dengan tRNA yang sepadan dengan kodon yang jarang ditemui, bertujuan untuk meningkatkan tahap ekspresi gen eksogen, terutamanya gen eukariotik, dalam sistem prokariotik. Diperolehi daripada BL21 dan membawa plasmid pRARE yang tahan kloramfenikol, ia menambah enam tRNA yang sepadan dengan kodon yang jarang ditemui (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC dan GGA) yang asalnya tiada dalam E. coli, memberikan ekspresi protein yang lebih "universal".

Kesimpulan

Tiga faktor utama untuk berjaya menghasilkan protein rekombinan ialah keadaan hos, vektor, dan kultur. Berdasarkan pemahaman tentang sifat fizikokimia protein rekombinan, kelebihan unik setiap strain, dan keperluan khusus eksperimen, perumah yang paling sesuai harus dipilih. Selain itu, faktor seperti vektor plasmid, suhu dan induser harus dioptimumkan untuk meningkatkan ekspresi protein.

Yaohai Bio-Pharma juga sedang giat mencari rakan kongsi global institusi atau individu dan menawarkan pampasan paling kompetitif dalam industri. Jika anda mempunyai sebarang pertanyaan, sila hubungi kami: [email protected]